琼脂糖凝胶电泳跑的DNA为什么会拖尾?
琼脂糖凝胶电泳跑的DNA为什么会拖尾 由于酶量过多或酶的质量差,dNTP浓度过高,Mg2+浓度过高,退火温度过低,循环次数过多,而造成PCR的非特异性产物 过多。对策:减少Taq酶的量,或调换另一来源的酶;减少dNTP的浓度;适当降低Mg2+浓度;增加模板量,减少引物的用量,减少循环次数,提高退火温度。琼脂糖的熔点在62?65°C之间,融化后在37°C下可维持液态数小时,30°C时凝固成胶。多用于对染色体DNA在凝胶内进行原位酶切及DNA片段回收。琼脂糖凝胶 由于孔径大常用于大分子蛋白质、DNA的分离。扩展资料:琼脂糖凝胶是依靠糖链之间的次级链如氢键来维持网状结构,网状结构的疏密依靠琼脂糖的浓度。一般情况下,它的结构是稳定的,可以在许多条件下使用(如水,pH4-9范围内的盐溶液)。琼脂糖凝胶在40℃以上开始融化,也不能高压消毒,可用化学灭菌活处理。把琼脂糖,即几乎不含硫酸根的主要成分为多糖的琼脂,溶于热水,冷却制成的凝胶。制成的小颗粒用于凝胶过滤。参考资料来源:-琼脂糖凝胶
生物实验中的“跑胶”是什么意思? 生物实验中的“跑胶”是指跑电泳。跑电泳就是用琼脂糖凝胶制作胶板从而让样品在胶板上产生电泳,所以简称“跑胶”分子生物学中的跑胶会出现条带,是因为带电荷的生物大分子。
DNA琼脂糖凝胶电泳出现拖尾的原因是什么 电泳出现拖尾现象2113,英文成为smear,就是5261弥散.其原因,主要从以下两4102个方面考虑:1、PCR产物1653自身原因:往往由于酶量过多或酶的质量差,dNTP浓度过高,Mg2+浓度过高,退火温度过低,循环次数过多,而造成PCR的非特异性产物 过多.对策:①减少Taq酶的量,或调换另一来源的酶.②减少dNTP的浓度.③适当降低Mg2+浓度.④增加模板量,减少引物的用量,减少循环次数,提高退火温度.2、电泳体系的问题:(1)电泳缓冲液TAE或者TBE的污染,建议更换缓冲液.(2)上样时样品漂了,建议增加上样缓冲液的用量,以及小心加样.(3)电压太高.(4)适当把你的胶的浓度加大.(根据你的片断大小而定)(5)观察你的marker是否也存在拖尾现象,作为对照.以前有挺多人问过这个问题了 借用下以往问题的最佳答案
核酸的染色方法有哪些?各有什么优点?使用时应该注意什么? 1、溴化乙锭2113(ethidium bromide,EB)最常用的核酸荧光染料,5261可嵌入核酸双链的配对碱基之间,在紫外线4102激发下,发出桔红色荧光。1653 EB-DNA复合物中的EB发出的荧光,比游离的凝胶中的EB发出的荧光强度大10倍,因此无需洗净背景即可清楚观察核酸带型。若EB背景太深,可将凝胶 浸泡于1mmol/LMgSO4中1h或10mmol/L MgCl2中5min,使非结合的EB褪色,这 样可检查到10ng的DNA样品,EB也可用于检测单链DNA或RNA,但其对单链核酸的亲和力相对较小,荧光产率也相对较低。在凝胶或电泳缓冲液中加入终浓度为0.5μg/ml的EB,染色可在电泳过程中进行,能随时观察核酸的迁移情况。但EB带正电荷,嵌入碱基后增加了 核酸分子的刚性,使迁移率减慢,故不宜用于测定核酸分子量的大小,这时应在电泳后将凝胶浸入0.5μg/ml的EB水溶液中10min进行染色。EB见光 易分解,应于4℃避光保存,2、吖啶橙(acridine orange,AO):吖啶橙可嵌入双链核酸碱基对之间,在254nm紫外线激发下发出530nm的绿色荧光;还通过静电与单链核酸的磷酸基结合,在254nm紫外线激发 下产生640nm的红色荧光。因此可区分单链和双链核酸,灵敏度分别为0.1μg和0.05μg。但吖啶橙的染色操作要求严格,应在 。