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核酸胶拖尾 提取DNA后为什么要跑胶

2020-10-15知识20

DNA琼脂糖凝胶电泳出现拖尾的原因是什么? 做出来结果是这样的。从右到左依次是marker、5ul样、10ul样、20ug样和最后一个做错的10ul。第一次做几乎…

核酸胶拖尾 提取DNA后为什么要跑胶

核酸凝胶电泳的电泳的基本原理 生物大分子在一定pH条件下,通常带电荷,将其置于电场中,会以一定的速度向与其电荷性质相反的电极迁移,迁移速度称电泳速率。电泳速率与电场强度、分子所带的净电荷数成正比,与分子与介质的摩擦系数成反比。摩擦系数与分子的大小、构型及介质的粘度有关。在生理条件下,DNA分子糖-磷酸骨架中的磷酸基团呈离子化状态,故DNA实际上呈多聚阴离子状态,在电场中向 正极方向迁移。糖-磷酸骨架在结构上重复,故等量的双链DNA几乎带等量的净电荷。如电场强度一定、电泳介质相同,电泳速率就取决于核酸分子的大小和构型。构型相似的分子:分子量越大、迁移越慢。分子量相同的分子(如质粒):cccDNA迁移最快、L-DNA次之、ocDNA最慢。

核酸胶拖尾 提取DNA后为什么要跑胶

提取DNA后为什么要跑胶 通过跑胶看看提取的DNA的长度,有没有很多断裂(跑胶后表现为拖尾严重),以及浓度(条带亮不亮),有没有RNA污染(表现为100bp一下还有一团一团的条带)

核酸胶拖尾 提取DNA后为什么要跑胶

问一下,就是,请问电泳DNA是否出现拖尾现象是要怎么判断的? 那琼脂糖凝胶电泳拖尾的几种情况及原因:1.PCR产物出现拖尾的因素有很多,总结为一条,就是非特异性扩增过多。原因可能是:(1)模板不纯:解决方法,纯化模板(2)Buffer不合适:解决方法,更换Buffer(3)退火温度偏低:解决方法,适当提高退火温度(4)酶量过多:解决方法,适量用酶,或调换另一种酶(5)dNTP、Mg2+浓度偏高:解决方法,适当降低dNTP和镁离子的浓度(6)循环次数过多:解决方法,减少循环次数(7)模板量少或引物量过多:解决方法,增加模板量,减少引物的用量2.提质粒的时候经常有这种个现象,有可能是样品浓度过高了。这种情况简单,稀释一下就行了。3.提基因组DNA的时候也常出现拖尾,最可能的就是提的DNA中掺杂有蛋白质,蛋白质会拽DNA的泳动。所以一定要注意提取基因的操作,减少蛋白质等杂质的出现。4.样品破碎或是被降解5.存在RNA:DNA前面的一片一般都是未清除的RNA,经过纯化,RNAse处理,就没有了6.电泳体系的问题:观察你的marker是否也存在拖尾现象,作为对照(1)电泳缓冲液TAE或者TBE的污染:。建议更换缓冲液。(2)上样时样品漂了,建议增加上样缓冲液的用量,以及小心加样。(3)电压太高:适当降低电压(4)根据。

DNA琼脂糖凝胶电泳出现拖尾的原因是什么 电泳出现拖尾现象2113,英文成为smear,就是5261弥散.其原因,主要从以下两4102个方面考虑:1、PCR产物1653自身原因:往往由于酶量过多或酶的质量差,dNTP浓度过高,Mg2+浓度过高,退火温度过低,循环次数过多,而造成PCR的非特异性产物 过多.对策:①减少Taq酶的量,或调换另一来源的酶.②减少dNTP的浓度.③适当降低Mg2+浓度.④增加模板量,减少引物的用量,减少循环次数,提高退火温度.2、电泳体系的问题:(1)电泳缓冲液TAE或者TBE的污染,建议更换缓冲液.(2)上样时样品漂了,建议增加上样缓冲液的用量,以及小心加样.(3)电压太高.(4)适当把你的胶的浓度加大.(根据你的片断大小而定)(5)观察你的marker是否也存在拖尾现象,作为对照.以前有挺多人问过这个问题了 借用下以往问题的最佳答案

全基因组DNA跑胶拖尾 如果连MAKER都没有2113跑开,那就应该是胶的问题了。先把5261胶做好了4102再跑试试看 1%的琼脂糖凝胶跑DNA应该是可以1653的我感觉可能1 胶放置的时间不够 还没有完全凝固 因此跑的乱2.做胶的时候琼脂糖是否已经完全溶解了再倒的板子?这两个可能性最大

琼脂糖凝胶电泳跑的DNA为什么会拖尾 由于酶量过多或酶的质量差,dNTP浓度过高,Mg2+浓度过高,退火温度过低,循环次数过多,而造成PCR的非特异性产物 过多。对策:减少Taq酶的量,或调换另一来源的酶;减少dNTP的浓度;适当降低Mg2+浓度;增加模板量,减少引物的用量,减少循环次数,提高退火温度。琼脂糖的熔点在62?65°C之间,融化后在37°C下可维持液态数小时,30°C时凝固成胶。多用于对染色体DNA在凝胶内进行原位酶切及DNA片段回收。琼脂糖凝胶 由于孔径大常用于大分子蛋白质、DNA的分离。扩展资料:琼脂糖凝胶是依靠糖链之间的次级链如氢键来维持网状结构,网状结构的疏密依靠琼脂糖的浓度。一般情况下,它的结构是稳定的,可以在许多条件下使用(如水,pH4-9范围内的盐溶液)。琼脂糖凝胶在40℃以上开始融化,也不能高压消毒,可用化学灭菌活处理。把琼脂糖,即几乎不含硫酸根的主要成分为多糖的琼脂,溶于热水,冷却制成的凝胶。制成的小颗粒用于凝胶过滤。参考资料来源:-琼脂糖凝胶

琼脂糖凝胶电泳跑的DNA为什么会拖尾? 看里的答案里提到PCR产物自身原因:往往由于酶量过多或酶的质量差,dNTP浓度过高,Mg2+浓度过高,退…

总DNA电泳拖尾严重是什么原因 1.电压过大,根据电泳槽设置合适的电压;2.缓冲溶液离子浓度过高,调整盐浓度在0.1mol/L以下;3.梳子插得过深,样品从胶板下部通过,梳子底部与胶槽应隔1-2mm(限于水平电泳);4.上样量过多,稀释DNA样品浓度或者减少上样量;5.酶切不完全,使用活性酶重新酶切;6.DNA发生了降解,重新提取DNA,并且加入DNase的抑制剂或者足够量的蛋白质的变性剂。

核酸胶如何配制? 首先确定要配胶的浓度,称好琼脂糖粉末的重量,加好相应量的TAE或TBE缓冲液,放到微波炉里面煮5分钟,倒至模具里面,插好梳子待其凝结就行

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