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求教高手!!基因组DNA电泳现象:电泳图分析一下(分布不均的原因,移动速率的影响因素)还有偶的结果 dna胶条带拖尾

2020-10-12知识13

PCR跑胶,目的条带很亮,但是边沿不清楚,前后有拖尾现象,请教各位是什么原因? 博凌科为-为你解答:1模板可能有降解,建议避免反复冻融,放置时间不能太长。模板的质量是最重要的。2抽提RNA时有污染,包括基因组DNA污染和蛋白质污染,需重 做抽提。3提高退火温度,减少非特异性扩增。4减少循环次数,减少非特异性扩增。5电泳缓冲液时间太长,ph值和盐离子浓度明显 改变。6电泳时电压不能太高,8V/cm。7一般来讲,基于promega和TaKaRa的PCR反应体系中,Mg和dNTP的浓度是相 匹配的,不需改动。8 加样量过大。过多的量会造成加样孔超载,从而导致拖尾和弥散,对于较大的DNA此现象更明显。9制胶过程中胶孔没 制好。10 EB没有冲洗干净。11模板混有基因组DNA,或模板中混有蛋白。12非特异反映。引物设计的不好,非特异,这种情 况容易出现非特异扩增造成有非特异性扩增带或拖尾现象。13电泳液用久了不换,电泳胶脏了。14扩增的条件不合适,一般退火温度低时容 易使引物在非特异位置结合引发扩增反应造成拖尾。针对以上情况,可以先提高退火温度试试,如果实在不行,再看看引物是不是合适。如果 内参可以扩出来,只能说明程序可能是适合的,但不能完全说明体系合适。体系内的各组分,如模板、dNTP、Mg离子、引物等都可能造成拖尾。先得考虑换了 那种成分。

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琼脂糖凝胶电泳跑的DNA为什么会拖尾 由于酶量过多或酶的质量差,dNTP浓度过高,Mg2+浓度过高,退火温度过低,循环次数过多,而造成PCR的非特异性产物 过多。对策:减少Taq酶的量,或调换另一来源的酶;减少dNTP的浓度;适当降低Mg2+浓度;增加模板量,减少引物的用量,减少循环次数,提高退火温度。琼脂糖的熔点在62?65°C之间,融化后在37°C下可维持液态数小时,30°C时凝固成胶。多用于对染色体DNA在凝胶内进行原位酶切及DNA片段回收。琼脂糖凝胶 由于孔径大常用于大分子蛋白质、DNA的分离。扩展资料:琼脂糖凝胶是依靠糖链之间的次级链如氢键来维持网状结构,网状结构的疏密依靠琼脂糖的浓度。一般情况下,它的结构是稳定的,可以在许多条件下使用(如水,pH4-9范围内的盐溶液)。琼脂糖凝胶在40℃以上开始融化,也不能高压消毒,可用化学灭菌活处理。把琼脂糖,即几乎不含硫酸根的主要成分为多糖的琼脂,溶于热水,冷却制成的凝胶。制成的小颗粒用于凝胶过滤。参考资料来源:-琼脂糖凝胶

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全基因组DNA跑胶拖尾

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提取的总RNA跑胶从大到小有几条带 提取的总RNA跑胶从大到2113小有带3条。三条是主带。哺乳动5261物的4102RNA包括mRNA,rRNA,tRNA和du小RNA,根据分子量和沉降系数1653的不同,rRNA又可分为28s,18s 和5.8s 的rRNA。从RNA的含量上看,rRNA是几种RNA中最多的,高达90%以上,而mRNA很少,只有1-2%,而其他两种RNA的分子量比较小,这就解释了为什么从凝胶电泳的结果上只能看到三条带。而这三条带的完整性,就代表了mRNA的完整性。扩展资料:RNA电泳可以在变性及非变性两种条件下进行。非变性电泳使用1.0%-1.4%的凝胶,不同的RNA条带也能分开,但无法判断其分子量。只有在完全变性的条件下,RNA的泳动率才与分子量的对数呈线性关系。因此要测定RNA分子量时,一定要用变性凝胶。在需快速检测所提总RNA样品完整性时,配制普通的1%琼脂 糖凝胶即可。

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琼脂糖凝胶电泳跑完,DNA条带颜色浅怎么回事? 谁能解释一下胶浓度与DNA条带颜色深浅的关系?还有,有时也会出现条带模糊不清,弥散的现象。

为什么DNA跑胶DNA带会向负极? 通过跑胶看看提取的DNA的长度,有没有很多断裂(跑胶后表现为拖尾严重),以及浓度(条带亮不亮),有没有RNA污染(表现为100bp一下还有一团一团的条带)

提取DNA后为什么要跑胶 通过跑胶看看提取的DNA的长度,有没有很多断裂(跑胶后表现为拖尾严重),以及浓度(条带亮不亮),有没有RNA污染(表现为100bp一下还有一团一团的条带)

琼脂糖凝胶电泳跑的DNA为什么会拖尾? 看里的答案里提到PCR产物自身原因:往往由于酶量过多或酶的质量差,dNTP浓度过高,Mg2+浓度过高,退…

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