DNA限制性内切酶消化的[注意事项]
DNA限制性内切酶酶切的影响因素 当微量的污染物进入限制性内切酶贮存液中时，会影响其进一步使用，因此在吸取限制性内切酶时，每次都要用新的吸管头。如果采用两种限制性内切酶，必须要注意分别提供各自的最适盐浓度。若两者可用同一缓冲液，则可同时水解。若需要不同的盐浓度，则低盐浓度的限制性内切酶必须首先使用，随后调节盐浓度，再用高盐浓度的限制性内切酶水解。也可在第一个酶切反应完成后，用等体积酚/氯仿抽提，加0.1倍体积3mol/L NaAc和2倍体积无水乙醇，混匀后置-70℃低温冰箱30分钟，离心、干燥并重新溶于缓冲液后进行第二个酶切反应。
DNA的限制性酶切及电泳分析实验方法. 1.反应体系的建立：⑴ 在一无菌1.5 ml Eppendorf管中加入：？无菌双蒸水 7 μl？10×酶切缓冲液 2 μl？质粒DNA(100 ng/μl)10 μl？EcoRⅠ(5 U/μl)1 μl？总体积为20μl⑵ 轻轻混匀，12000 rpm离心5 sec。2.37 ℃水浴1 h。3.将Eppendorf管置65 ℃水浴中10 min，通过加热使酶失活以终止反应。4.12000 rpm离心5 sec，将管盖及管壁上的水离下。5.取10 μl消化产物，与2 μl 6×上样缓冲液混匀，琼脂糖凝胶电泳检测消化效果，电泳条件：约100 V 30～60 min。6 结果观察。操作注意事项：1.吸样量一定要准确2.为了不使酶污染而导致浪费，最后才加酶3.要求在冰上操作，并充分混匀，4.开启Eppendorf管时，手不要接触到管盖内面，以防污染。5.样品在37 ℃与65 ℃保温时，将离心管盖严，以防水进入管内造成实验失败。限制性内切酶酶解中常见的问题和原因1.DNA完全没有被限制性内切酶切割：①限制性内切酶失活；②DNA不纯，含有SDS、有机溶剂、EDTA等；③非限制性内切酶最佳反应条件；④酶切位点被修饰；⑤DNA上不存在该酶的识别顺序。2.DNA切割不完全：①限制性内切酶活性下降或稀释不正确；②DNA不纯或反应条件不佳；③酶切位点被修饰；④部分DNA溶液粘在管壁上；⑤酶切后DNA粘末端退火。。
dna限制性内切酶酶切时，有哪些注意事项 1)购买的限制性内切酶 带有两种不同的酶切缓冲液，该用哪一种每种限制性内切酶 带有一管酶的最适反应液(通常是一种4-CORE反应液)，可能还带有一只MULTI-CORE反应液。
限制性核酸内切酶切割的原理和方法 100分在线等，急啊。希望大神解答的全一点，因为要作为资料交上去。谢谢！以DNA限制性核酸内切酶为例 1DNA限制性内切酶相关简介编辑 生物体内能识别并切割特异的双链DNA。
把目的基因连接到质粒上构建重组质粒时该如何选择限制性内切酶？引物如何设计？ 重组时选择你的目的基因上没有，而质粒的多克隆位点上有的酶切位点，一般重组质粒需要两个酶，所以你要选择两个酶切位点，注意尽量避免使用切出平末端的酶.重组引物设计时首先你要确定你选择的两个酶在的酶切位点在质粒.
