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taq聚合酶有什么酶活性 Taq DNA聚合酶活力测定方法

2020-10-04知识12

TaqDNA聚合酶是什么酶?其作用是什么? TaqDNA聚合酶 Taq DNA聚合酶是从一种水生栖热菌(Thermusaquaticus)yT1株分离提取的.yT是 一种嗜热真菌,能在70~75℃生长.该菌是1969年从美国黄石国家森林公园火山温泉中分离的.该酶基因全长2496个碱基,编码832个氨基酸,酶蛋白分子为 94KDa.其比活性为200000单位/mg.75~80℃时每个酶分子每秒钟可延伸约150个核苷 酸,70℃延伸率大于60个核苷酸/秒,55℃时为24个核苷酸/秒.温度过高(90℃以上)或过低(22℃)都可影响Taq DNA聚合酶的活性,该酶虽然在90℃以上几乎无DNA合成,但确有良好的热稳定性,在PCR循环的高温条件下仍能保持较高的活性.在92.5℃、95℃、97.5℃时,PCR混合物中的Taq DNA聚合酶分别经130min,40min和5~6min后,仍可 保持50%的活性,实验表明.PCR反应时变性温度为95℃~20sec,50个循环后,Taq DNA聚合酶仍有65%的活性.Taq DNA聚合酶的热稳定性是该酶用于PCR反应的前提条 件,也是PCR反应能迅速发展和广泛应用的原因.Taq DNA聚合酶还具有逆转录活性,其作用于类似逆转录酶.此活性温度一般为65~68℃,有Mn2+存在时,其逆转录活性 更高.TaqDNA聚合酶是Mg2+依赖性酶,该酶的催化活性对Mg2+浓度非常敏感.以活性程度 很低的鲑鱼精子DNA为模板,dNTP的浓度为0.7~0.8mmol/L时,用不同。

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taq dna聚合酶有聚合活性,但是那两个外切活性有么?是只有一个还是两个都没有,求生物高手解答!taq dna聚合酶有聚合活性,但是那两个外切活性有么?。

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Taq DNA聚合酶中 5'→3'外切酶活性是说从5’端开始分解DNA,那么在pcr过程中DNA不就全分解了吗? 5'→3'外切酶只作用于双链DNA的碱基配对部分,从5‘末端水解下核苷酸和寡核苷酸。被公认为在切除由紫外线照射而形成的嘧啶二聚体。对正常配对的核苷酸,它应该是不起作用的。DNA半不连续合成中的冈崎片段5’端RNA引物的切除也依赖于这个酶。

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Taq DNA聚合酶是一种______聚合酶,具有______和______活性,有或无______活性。 耐热$5&39;3&39;DNA聚合酶活性$5&39;3&39;外切酶$3&39;5&39;外切酶活性

Taq DNA聚合酶有几种 你问的应该是DNA聚合酶有几种吧?因为TaqDNA聚合酶就是TaqDNA聚合酶,该酶可在离体条件下,以DNA为模板,延伸引物,合成双链DNA.只有5′3′DNA聚合酶活性和5′3′的外切酶活性,缺少3′5′的外切酶活性.而DNA聚合酶.

Taq DNA聚合酶活力测定方法 一种Taq DNA聚合酶冷启动活性检测方法,其具体操作步骤为(1)引物和假模板的设计及合成选择任意一段已知序列的DNA作为模板,根据模板DNA序列,利用引物设计软件设计一对PCR引物,并进行人工合成,其包括正义引物和反义引物;人工合成一DNA片段,使其5‘端部分与上述PCR引物的正义引物或反义引物互补,3‘端部分与模板DNA的序列完全不同,将这段DNA命名为假模板;假模板3‘端部分与模板DNA的序列完全不同的部分,其长度为 3 30个碱基,优选为8 18个碱基。(2)PCR反应前假模板与弓I物的处理用水分别稀释合成的正义引物、反义引物和假模板,然后分别取稀释后的假模板以及 5’端部分与假模板互补的正义引物或反义引物,混合均匀,使假模板的摩尔浓度与5’端部分与假模板互补的正义引物或反义引物的摩尔浓度比为1:1 1:1.1,使其充分变性,然后缓慢复性,得到混合物I,备用;(3)PCR反应体系的配制将模板DNA、混合物I、5’端部分不与假模板互补的反义引物或正义引物、PCR缓冲液、氯化镁、DNTP混合物和待测定的Taq DNA聚合酶,加入同一个PCR管中,组成PCR反应体系;(4)PCR反应将步骤(3)所制备PCR反应体系放入PCR仪中25°C放置60 Min,接着进入PCR反应,其具体反应条件,可。

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