DNA琼脂糖凝胶电泳出现拖尾的原因是什么 电泳出现拖尾现象2113,英文成为smear,就是5261弥散.其原因,主要从以下两4102个方面考虑:1、PCR产物1653自身原因:往往由于酶量过多或酶的质量差,dNTP浓度过高,Mg2+浓度过高,退火温度过低,循环次数过多,而造成PCR的非特异性产物 过多.对策:①减少Taq酶的量,或调换另一来源的酶.②减少dNTP的浓度.③适当降低Mg2+浓度.④增加模板量,减少引物的用量,减少循环次数,提高退火温度.2、电泳体系的问题:(1)电泳缓冲液TAE或者TBE的污染,建议更换缓冲液.(2)上样时样品漂了,建议增加上样缓冲液的用量,以及小心加样.(3)电压太高.(4)适当把你的胶的浓度加大.(根据你的片断大小而定)(5)观察你的marker是否也存在拖尾现象,作为对照.以前有挺多人问过这个问题了 借用下以往问题的最佳答案
pcr产物在电泳仪中跑胶出现拖尾现象是怎么回事 有一下几种可能性:PCR扩增产物浓度很高,overloading造成的拖带模板量加太多了引物或者模板的原因,条带扩增的时候带入了很多杂带
提取动物组织DNA跑琼脂糖凝胶拖尾原因是什么? 提取了鱼鳍组织DNA最左边是DL2000marker,后几个为样品,电压为120v,30min,百分之一的琼脂糖凝胶,上样…
PCR跑胶,目的条带很亮,但是边沿不清楚,前后有拖尾现象,请教各位是什么原因? 博凌科为-为你解答:1模板可能有降解,建议避免反复冻融,放置时间不能太长。模板的质量是最重要的。2抽提RNA时有污染,包括基因组DNA污染和蛋白质污染,需重 做抽提。3提高退火温度,减少非特异性扩增。4减少循环次数,减少非特异性扩增。5电泳缓冲液时间太长,ph值和盐离子浓度明显 改变。6电泳时电压不能太高,8V/cm。7一般来讲,基于promega和TaKaRa的PCR反应体系中,Mg和dNTP的浓度是相 匹配的,不需改动。8 加样量过大。过多的量会造成加样孔超载,从而导致拖尾和弥散,对于较大的DNA此现象更明显。9制胶过程中胶孔没 制好。10 EB没有冲洗干净。11模板混有基因组DNA,或模板中混有蛋白。12非特异反映。引物设计的不好,非特异,这种情 况容易出现非特异扩增造成有非特异性扩增带或拖尾现象。13电泳液用久了不换,电泳胶脏了。14扩增的条件不合适,一般退火温度低时容 易使引物在非特异位置结合引发扩增反应造成拖尾。针对以上情况,可以先提高退火温度试试,如果实在不行,再看看引物是不是合适。如果 内参可以扩出来,只能说明程序可能是适合的,但不能完全说明体系合适。体系内的各组分,如模板、dNTP、Mg离子、引物等都可能造成拖尾。先得考虑换了 那种成分。
跑胶时为什么会拖带? 试下降低模版浓度、减少循环次数,或是升高Tm值、增加引物特异性.拖带可能是以下原因:1:电压太高2:你的胶浓度太低3:非特异扩增4:回收时操作有问题,造成片段部分降解,所以条带弥散;
跑胶时有拖尾是怎么回事
琼脂糖凝胶电泳跑的DNA为什么会拖尾? 看里的答案里提到PCR产物自身原因:往往由于酶量过多或酶的质量差,dNTP浓度过高,Mg2+浓度过高,退…
琼脂糖凝胶电泳跑的DNA为什么会拖尾 由于酶量过多或酶的质量差,dNTP浓度过高,Mg2+浓度过高,退火温度过低,循环次数过多,而造成PCR的非特异性产物 过多。对策:减少Taq酶的量,或调换另一来源的酶;减少dNTP的浓度;适当降低Mg2+浓度;增加模板量,减少引物的用量,减少循环次数,提高退火温度。琼脂糖的熔点在62?65°C之间,融化后在37°C下可维持液态数小时,30°C时凝固成胶。多用于对染色体DNA在凝胶内进行原位酶切及DNA片段回收。琼脂糖凝胶 由于孔径大常用于大分子蛋白质、DNA的分离。扩展资料:琼脂糖凝胶是依靠糖链之间的次级链如氢键来维持网状结构,网状结构的疏密依靠琼脂糖的浓度。一般情况下,它的结构是稳定的,可以在许多条件下使用(如水,pH4-9范围内的盐溶液)。琼脂糖凝胶在40℃以上开始融化,也不能高压消毒,可用化学灭菌活处理。把琼脂糖,即几乎不含硫酸根的主要成分为多糖的琼脂,溶于热水,冷却制成的凝胶。制成的小颗粒用于凝胶过滤。参考资料来源:-琼脂糖凝胶
pcr产物在电泳仪中跑胶出现拖尾现象是怎么回事? 1.很可能是胶没煮好!煮的时候要沸腾三次,摇匀,不然胶的密度不均一。2.电压,电压过高也会拖带3.可以适当提高电泳槽里面的缓冲液浓度。4.如果还是不好,可以换一个稍微宽一点的梳子,一般效果会好很多。
pcr跑胶结果出现拖尾、弥散说明什么? 拖尾可能是模板量太大;弥散可能是因为延伸时间不够。