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问题描述:请问:肺泡蛋白沉淀症是怎样引起的有哪症状和... 蛋白沉淀分析与思考

2021-04-03知识8

蛋白质的沉淀反应 首先:你要知道,蛋白质是带有电荷的,一种蛋白质在某一个pH下,蛋白质的电荷被中和,溶解度最小,这个pH成为等电点.(你们用的蛋白质的等电点估计就是4.7)其次,乙醇使得蛋白质的二级、三级、四级结构变化,但是不改变蛋白质的一级结构,也就是说,蛋白质还是原来的两性物质(既有酸性又有碱性,所以能够溶于酸和碱).好了1号管有乙醇,还有缓冲液(缓冲液就是由酸碱组成的),1号管沉淀了,你要说明这是因为乙醇而不是缓冲液啊.所以你需要二号三号管来证明,酸和碱都没有使蛋白质沉淀(因为变性的蛋白质被酸碱溶解了),而且中和之后就发现沉淀出现了,说明沉淀是因为乙醇而不是酸碱.至于甲基红,是为了指示酸碱度,你不是要中和嘛,没有指示剂你怎么滴定?

常用的沉淀蛋白质的方法有哪些 前已有很多去蛋白来方法可供使自用,但使用各2113种方法之前应了5261解该方法是否会导4102致生物样品中的1653药物发生分解或影响药物的提取等。通常除蛋白的方法是在含蛋白样品中加入适当的沉淀剂或变性剂,而有机溶剂和酸类沉淀的蛋白是不可逆的。也可用透析法与超滤法除去样品中蛋白。当然还可以热沉淀,使蛋白质脱水而沉淀(如有机溶剂、中性盐),有的是由于蛋白质形成不溶性盐而析出(如高氯酸),离心后取上清液用于分析。甲醇、乙腈、丙酮和乙醇是沉淀蛋白常用的有机溶剂,中性盐可用氯化铵等。无机盐沉淀蛋白是可逆的,即将蛋白稀释后仍具有生理活性

沉淀蛋白质的几种方法及应用实例 1.盐析法—多用于各种蛋白质和酶的分离纯化在蛋白质溶液中加入大量的中性盐以破坏蛋白质的胶体稳定性而使其析出,这种方法称为盐析.常用的中性盐有硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等.各种蛋白质盐析时所需的盐浓度及pH不同,故可用于对混和蛋白质组分的分离.例如用半饱和的硫酸铵来沉淀出血清中的球蛋白,饱和硫酸铵可以使血清中的白蛋白、球蛋白都沉淀出来,盐析沉淀的蛋白质,经透析除盐,仍保证蛋白质的活性.调节蛋白质溶液的pH至等电点后,再用盐析法则蛋白质沉淀的效果更好.盐析法分为两类,第一类叫Ks分段盐析法,在一定PH和温度下通过改变离子强度实现,用于早期的粗提液;第二种叫b分段盐析法,在一定离子强度下通过改变PH和温度来实现,用于后期进一步分离纯化和结晶.影响盐析的因素包括:蛋白质浓度、离子强度和类型、PH值、温度等.针对温度这一条,需要强调:在低离子强度或纯水中,蛋白质溶解度在一定范围内随温度增加而增加.但在高浓度下,蛋白质、酶和多肽类物质的溶解度随温度上升而下降.在一般情况下,蛋白质对盐析温度无特殊要求,可在室温下进行,只有某些对温度比较敏感的酶要求在0-4℃进行.使用硫酸铵沉淀蛋白需要注意:硫酸铵中常含有少量的重金属离子,对蛋白质巯基有敏感作用,。

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