做western blot 实验，怎么煮蛋白 根据样品形式的差异进行选择。如果是研究纯化的蛋白，可以用100℃，煮5min就行；如果是研究细胞样品的膜蛋白，可以用膜蛋白抽提试剂盒先做目的蛋白的富集，而后同上处理。
酶的分离和纯化方法是什么？ 酶的分离纯化2113一般包括三个基本步骤：即抽提、5261纯化、结晶或制剂。4102首先将所需的酶从原料中引1653入溶液，此时不可避免地夹带着一些杂质，然后再将此酶从溶液中选择性地分离出来，或者从此溶液中选择性地除去杂质，然后制成纯化的酶制剂。酶分离纯化的最终目的是获得单一纯净的酶，因此，容许在不破坏“目的酶”的限度内，使用各种手段；酶与底物和抑制剂的结合常使其理化性质和稳定性发生改变，这种特性已被用于酶的分离纯化。由于酶及其来源的多样性及与之共存的高分子物质的复杂性，目前还很难找到一种通用的方法以适用于一切酶的纯化。为了使一种酶达到高度纯化，往往需要多种方法协同作用，通过酶活性的跟踪检测确定最佳流程。扩展资料：酶的本性是蛋白质，凡可用于蛋白质分离纯化的方法都同样适用于酶，但酶易失活，故分离纯化需在低温(4℃)、温和pH(4<；pH>；10)等条件下进行。与蛋白质类似，酶易在溶液表面或界面处形成薄膜而变性，因此操作中应尽量减少泡沫形成，此外重金属易使酶失效，有机溶剂能使酶变性，微生物污染以及蛋白水解酶的存在能使酶分解破坏。在进行菌种鉴定时，所用的微生物一般均要求为纯的培养物。得到纯培养的过程称是分离纯化。。
蛋白质纯化技术的方法有哪几种？ 电泳是蛋白纯化过程中一种检测方式。主要步骤：第一步富集：如果是有标签的蛋白，一般用亲和色谱（affinity chromatography）是利用生物大分子间所具有的特异性亲和能力。
去年纯化的蛋白很好，今年怎么都纯化不好 在亲和纯化中，his标签常常会遇到这种问题，没有收集到蛋白可能是蛋白溜走了，没有收集到，可能使样品的缓冲液不正确，尤其针对pH值，或者是his标签没有暴露出来，因此没有挂住，或者可以用WB检测一下HIS是否还在，更多his亲和纯化的相关问题，可见文章，总结的比较实际有用，希望对你有所帮助透析和盐析有很大的区别，都有合适的用处，没有好坏的区别透析主要的目的是换液，由于绝大部分蛋白都属于大分子，所以透析能起到的纯化效果非常有限。盐析主要的目的是富集和粗提，由于蛋白质疏水性的区别，能够分离开不少蛋白，但容易造成目的蛋白变性。
求助关于蛋白纯化的问题 在亲和纯化中，his标签常常会遇到这种问题，没有收集到蛋白可能是蛋白溜走了，没有收集到，可能使样品的缓冲液不正确，尤其针对pH值，或者是his标签没有暴露出来，因此没有挂住，或者可以用WB检测一下HIS是否还在，his亲和纯化的相关问题，可见文章，总结的比较实际有用，希望对你有所帮助透析和盐析有很大的区别，都有合适的用处，没有好坏的区别透析主要的目的是换液，由于绝大部分蛋白都属于大分子，所以透析能起到的纯化效果非常有限。盐析主要的目的是富集和粗提，由于蛋白质疏水性的区别，能够分离开不少蛋白，但容易造成目的蛋白变性。
蛋白纯化过镍柱以后为什么会沉淀啊？？ 蛋白浓度过高的时候，会发生聚集而沉淀。有些不易溶蛋白随着镍柱的富集作用就会沉淀。由于不知道你实验目的，简单认为你要纯化表达的蛋白，解决方法：1.换更强亲水肽段载体。
融合蛋白纯化 His-Tag融合蛋白是目前最常见的表达方式，而且很成熟，它的优点是表达方便而且基本不影响蛋白的活性，无论是表达的蛋白是可溶性的或者包涵体都可以用固定金属离子亲和色谱去。
融合蛋白纯化 2．1 IMAC是Porath et al.1975年用固定IDA作为配基的填料螯合过渡金属铜、镍、钴或锌离子，可以吸附纯化表面带组氨酸、色氨酸或半胱氨酸残基的蛋白，1987年Smith et al。.
