如何用SDS法提取植物DNA?SDS.提取液如何配置？~~~大神们快来帮帮小学渣… 植物dna提取液配方

如何配制 lysis buffer 裂解缓冲液：抽提裂解液(PH 8.0)：1L0.1M Tris-HCl（12.44 克）；1.4M NaCl（81.816 克）；0.02 M Na2EDTA（7.45 克）；2%CTAB（20 克）；0.1%DIECA（1 克）；2%PVP K-30（20 克）加 0.2%β-巯基乙醇后调 PH 值至.CTAB法提取DNA的原理， CTAB法原理 CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide，十六烷基三甲基溴化铵)，是一种阳离子去污剂，具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性.在高离子强度的溶液中(>；0.7mol/L NaCl)，CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物，只是不能沉淀核酸.通过有机溶剂抽提，去除蛋白，多糖，酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来.CTAB提取缓冲液的经典配方Tris-HCl(pH8.0)提供一个缓冲环境，防止核酸被破坏；EDTA螯合Mg2+或Mn2+离子，抑制DNase活性；NaCl 提供一个高盐环境，使DNP充分溶解，在于液相中；CTAB溶解细胞膜，并结合核酸，使核酸便于分离；β-巯基乙醇是抗氧化剂，有效地防止酚氧化成醌，避免褐变，使酚容易去除PVP(聚乙烯吡咯烷酮)是酚的络合物，能与多酚形成一种不溶的络合物质，有效去除多酚，减少DNA中酚的污染；同时它也能和多糖结合，有效去除多糖.用酚抽提细胞DNA时，有什么作用？使蛋白质变性，同时抑制了DNase的降解作用.用苯酚处理匀浆液时，由于蛋白与DNA 联结键已断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶.蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相.使用酚的优点：1.有效变性蛋白质；2抑制了DNase的降解作用.缺点：1.能溶解10-15%的水，从而溶解一部分poly(A)RNA.2.不能。水煮法提取DNA 的详细过程 水煮法提取DNA【试剂2113】缓冲液和溶液：用于5261筛选质粒的抗生4102素；氯霉素（1653 34mg/ml）；选用：乙醇；异丙醇(PH8.0)酶和缓冲液：溶菌酶（10mg/ml）；限制性内切核酸酶凝胶：琼脂糖凝胶【实验操作过程】1、将500ml 培养物的细菌沉淀物重悬于用冰预冷的10mlSTET【（0.1mol/L NaCl10mmol/LTris·Cl（pH8.0）1mmol/L EDTA（pH 8.0）】中。将悬液移入50ml锥瓶中。2、加入1ml新配制的溶菌酶溶液[10mg/ml，沉淀于10mmol/LTris.Cl（pH8.0）]。如溶液的pH值低于0.8溶菌酶不能有效地发挥作用。3、用一个夹子把锥瓶放在酒精灯的明火上加热，直至液体恰好开始沸腾，不停地摇晃锥瓶。4、立即把瓶浸入装有沸水的大烧杯（2L）中，将瓶放在沸水中，时间恰为40s。5、将瓶浸入用冰预冷的水中5min，使之冷却。6、将粘稠状内容物从瓶中转移到超离心管，于4℃以30000rpm离心30min。原有的细菌物生长得越密，应越难将粘稠状裂解物转移到离心管中。必要时，可用长刀片和剪刀将裂解物剪成大小适于操作的大团块，或抽入10ml注射器的针筒中使之部分剪切。从用氯霉素处理的细菌培养物中分离质粒DNA时，一般不会出现这样的问题。如果细菌碎片没能形成紧密的团块，可以以35000。提取植物DNA过程中，24：1即氯仿：异戊醇，求问异戊醇的作用。 异戊醇作用：减少 蛋白质变性 操作过程中产生的气泡。异戊醇可以降低表面张力，从而减少气泡产生。另外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相。ctab法dna提取液各种成分的作用是什么？ 1、裂解液要预热，以抑制DNase，加速蛋白变性，促进DNA溶解。2、酚一定要碱平衡。苯酚具有高度腐蚀性，飞溅到皮肤、粘膜和眼睛会造成损伤，因此应注意防护。氯仿易燃、易爆、。植物DNA提取 原理是一致的。方法不同。1植物组织提取基因组DNA一、材料幼嫩叶子。二、设备移液器，冷冻高速离心机，台式高速离心机，水浴锅，陶瓷研钵，50ml离心管（有盖）及5ml和1.5ml离心管，弯成钩状的小玻棒。三、试剂1、提取缓冲液Ⅰ：100mmol/L Tris·Cl，pH8.0，20mmol/L EDTA，500mmol/L NaCl，1.5%SDS。2、提取缓冲液Ⅱ：18.6g葡萄糖，6.9g二乙基二硫代碳酸钠，6.0gPVP，240ul巯基乙醇，加水至300ml。3、80：4：16/氯仿：戊醇：乙醇4、RnaseA母液5、其它试剂：液氮、异丙醇、TE缓冲液，无水乙醇、70%乙醇、3mol/L NaAc。四、操作步骤：1.在50ml离心管中加入20ml提取缓冲液Ⅰ，60℃水浴预热。2.幼苗或叶子5-10g，剪碎，在研钵中加液氮磨成粉状后立即倒入预热的离心管中，剧烈摇动混匀，60℃水浴保温30-60分钟(时间长，DNA产量高)，不时摇动。3.加入20ml氯仿/戊醇/乙醇溶液，颠倒混匀(需带手套，防止损伤皮肤)，室温下静置5-10分钟，使水相和有机相分层(必要时可重新混匀)。4.室温下5000rpm离心5分钟。5.仔细移取上清液至另一50ml离心管，加入1倍体积异丙醇，混匀，室温放置片刻即出现絮状DNA沉淀。6.在1.5ml eppendorf中加入1ml TE。用钩状玻璃棒捞出DNA絮团，在干净吸水纸上吸干，转入含。DNA粗提取实验步骤？ 一 教学目的 1.初步掌握DNA的粗提取和鉴定的方法。2.观察提取出来的DNA物质。二 教学建议 在本实验的教学中，教师应注意以下几点。1.实验材料必须准备充足。。SDS法提取植物DNA，DNA提取液中的各项药剂浓度及配置时每种药品的体积，及提取方法。谢谢 真菌的DNA提取方法：一、SDS法基本原理是研磨的组织细胞用热的SDS裂解后，加入高浓度的KAc，0℃放置以除去蛋白和多糖类杂质，最后用乙醇或异丙醇沉淀。1、试剂(1)提取缓冲液Tris-HCl 100mmol/L（pH8.0）EDTA 50mmol/L（pH8.0）NaCl 500 mmol/L 灭菌后加β-巯基乙醇至10 mmol/L(2)裂解液20%SDS(3)高盐溶液5mol/L KAc(4)RNaseA 10mg/ml(5)异丙醇(6)灭菌ddH2O或TE2、仪器离心机，恒温水浴，台式高速离心机，电泳装置3、实验程序（1）、离心菌体，再用灭菌ddH2O冲洗2次，放入经液氮预冷的研钵中，加入液氮研磨至粉末状，用干净的灭菌不锈钢勺转移粉末到加有500μL提取液的离心管中，轻轻混匀。（2）、向管中加入50μL20%SDS溶液，混匀，不可过于强烈震荡以防基因组DNA断裂，65℃保温10min，并不时摇动。（3）、加入150μL 5mol/L KAc，混匀，置冰上20-30 min。（4）、4℃，15 000rpm离心15min，转移上清到另一离心管中，加入0.7V的异丙醇，混匀，-20℃沉淀30 min。（5）、12 000rpm离心10min回收基因组DNA沉淀，吹干后加入适量的灭菌ddH2O或TE溶解DNA。（6）、加入1/10体积的RNaseA，37℃保温20min，除去RNA。（7）、C：I抽提后，加2V乙醇，-20℃沉淀30 min。12。如何用SDS法提取植物DNA？SDS.提取液如何配置？~~~大神们快来帮帮小学渣… 药品试剂及耗材：液氮提取缓 冲液：500 mmol/L NaCl，100 mmol/L Tris-HCl ph8，50 mmol/L EDTA ph8，10 mmol/L 2-巯基乙醇（用前加入）20%SDS ph7.2-5 mol/L KAc氯仿：异戊醇（24：1）—异丙醇—70%乙醇TE缓冲液：10 mmol/L Tris-HCl，1 mmol/L EDTA，PH8.0DNA实验室常用的DNA提取方法有哪些 提取DNA主要有SDS和CTAB法，其实提取效果的好坏主要看提取的对象是什么样的材料，在提取之前一定要好好分析材料的特性，然后在设计实验步骤。一）CTAB法CTAB是一种去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中（0.7 mol/L NaCl）是可溶的，当降低溶液盐浓度到一定程度（0.3 mol/L NaCl）时，从溶液中沉淀，通过离心就可将CTAB与核酸的复合物同蛋白质、多糖类物质分开，然后将CTAB与核酸的复合物沉淀溶解于高盐溶液，再加入乙醇使核酸沉淀，CTAB能溶解于乙醇。（二）SDS法利用高浓度的SDS，在较高温度（55—65℃）条件下裂解细胞，使染色体离析，蛋白质变性，释放出核酸，然后采用提高盐浓度及降低温度的做法使蛋白质及多糖杂质沉淀（最常用的是加入5M的KAc于冰上保温，在低温条件下KAc与蛋白质及多糖结合成不溶物），离心除去沉淀后，上清液中的DNA用酚/氯仿抽提，反复抽提后用乙醇沉淀水相中的DNA。以下是在提取热带水果DNA时设计的两种不同方法步骤，对比起来CTAB法好，在禾本科植物效果差不多！1、CTAB法1）在所需量的CTAB抽提液中加入2－巯基乙醇，使终浓度达2％（v/v）。将此溶液预热至65℃。对于每克新鲜的叶组织大约需要4ml的2－ME/CTAB抽提。

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