分离胶和浓缩胶的区别是什么 1、性质不同浓缩胶：在不连续聚丙烯 酰胺凝胶电泳中，同一介质的凝胶浓度分为 两种，负极的加样侧一般浓度为2%？5%。分离胶：不连续缓冲体系聚丙烯酰胺凝胶电泳中的一部分，其组成、缓冲液pH和凝胶孔径与浓缩凝胶不同。它具有分子筛效应的小孔径凝胶。2、过程不同浓缩胶过程：由于浓缩胶浓度低、孔径大，分离胶浓度高，孔径小。带电蛋白质或核酸离子在大孔径凝胶中运动时，阻力小，运动速度快。当接近小孔径凝胶时，阻力较大，移动速度减慢，使样品浓缩，形成窄带，减少电泳过程中的带扩散。分离胶过程：蛋白质或核酸在电泳过程中由浓缩胶进入分离胶，由于分子筛的作用，小分子物质容易通过，阻力小，迁移速度快。大分子由于较大的电阻而滞后，因此，即使具有类似净电荷和相等的游泳率的物质，也会根据分子量的不同而通过分子筛效应从凝胶中分离出来。扩展资料；分离胶使用注意事项；(一)在室温15～30℃，相对湿度60%以下，刷胶后的纸边自然吸收反应时间缩短，一股15～30分钟左右分离好。若室温低于15℃(如冬季12月至3月份)，湿度大于60%(夏季)，刷胶后的纸边自然吸收反应时间延长，一般30～50分钟，才能达到最佳分离效62616964757a686964616fe78988e69d。
western blot配胶时为什么上层胶会断裂 可能你放胶的袋子没有密封好，时间一长就干了。一、配胶注意一定要将玻璃板洗净，最后用ddH2O冲洗，将与胶接触的一面向下倾斜置于干净的纸巾晾干。分离胶及浓缩胶均可事先配好（除AP及TEMED外），过滤后作为储存液避光存放于4度，可至少存放1个月，临用前取出室温平衡（否则凝胶过程产生的热量会使低温时溶解于储存液中的气体析出而导致气泡，有条件者可真空抽吸3分钟），加入10%AP（0.7~0.8：100，分离 胶浓度越高AP浓度越低，15%的分离胶可用到0.5：100）及TEMED（分离胶用0.4：1000，15%的可用到0.3：1000，浓缩胶用0.8：1000）即可，如室温较低可升高10%AP及TEMED浓度到《分子克隆》建议浓度。封胶：灌入2/3的分离胶后应立即封胶，胶浓度时可用0.1%的SDS封，浓度＞10%时用水饱和的异丁醇或异戊醇，也可以用0.1%的SDS。封胶后切记，勿动。待胶凝后将封胶液倒掉，如用醇封胶需用大量清水及ddH2O冲洗干净，然后加少量0.1%的SDS，目的是通过降低张力清除残留水滴。片刻后倒掉SDS，将玻璃板倒立放置片刻控净。灌好浓缩胶后1h拔除梳子，注意在拔除梳子时宜边加水边拔，以免有气泡进入梳孔使梳孔变形。拨出梳子后用ddH2O冲洗胶孔两遍以去除残胶，随后用0.1%的SDS封胶。。
SDS-PAGE蛋白电泳配胶不凝固 1，多加过硫酸铵试试2，多加点TEMED，可加速凝固3，配好胶后放在温箱里凝的快些，环境温度低会影响凝的速度.我在冬天会灌好胶后放在培养箱里，一般很快就凝了，可以提高效率，一天最多可以跑5次.最后，经常出现浓缩胶凝但不成形，非常粘，这是因为C液（浓缩胶缓冲液）的pH值不对，重新配制C液做了四年蛋白电泳实验，不凝是是最初发生的问题，基本按以上思路解决的，以后再没遇见过，但也不排除我能力范围之外的没想到的因素
SDS-PAGE的分离胶和浓缩胶中tris-Hcl的PH不同，为什么？什么作用？ 在SDS－PAGE不连续电泳中，制胶缓冲液使用的是Tris－HCL缓冲系统，浓缩胶是pH6.7，分离胶pH8.9；而电泳缓冲液使用的Tris－甘氨酸缓冲系统。在浓缩胶中，其pH环境呈弱酸性，因此甘氨酸解离很少，其在电场的作用下，泳动效率低；而CL离子却很高，两者之间形成导电性较低的区带，蛋白分子就介于二者之间泳动。由于导电性与电场强度成反比，这一区带便形成了较高的电压剃度，压着蛋白质分子聚集到一起，浓缩为一狭窄的区带。当样品进入分离胶后，由于胶中pH的增加，呈碱性，甘氨酸大量解离，泳动速率增加，直接紧随氯离子之后，同时由于分离胶孔径的缩小，在电场的作用下，蛋白分子根据其固有的带电性和分子大小进行分离。
SDS-PAGE蛋白电泳配胶不凝固 1，多2113加过硫酸铵试试2，多加点TEMED，可加5261速凝固3，配好胶后放在温箱里凝的4102快些，环境温度低会影响凝的速度1653。我在冬天会灌好胶后放在培养箱里，一般很快就凝了，可以提高效率，一天最多可以跑5次。最后，经常出现浓缩胶凝但不成形，非常粘，这是因为C液（浓缩胶缓冲液）的pH值不对，重新配制C液做了四年蛋白电泳实验，不凝是是最初发生的问题，基本按以上思路解决的，以后再没遇见过，但也不排除我能力范围之外的没想到的因素
浓缩胶的作用原理 浓缩胶是在不连续聚丙烯 酰胺凝胶电泳中，同一介质的凝胶浓度分为 两种，负极的加样侧一般浓度为2%？5%，称为浓缩胶，其余部分浓度为6%？8%，称为分离胶。由于浓缩胶浓度低、孔径大，而分离胶浓度高、孔径小。带电荷的蛋白质 或核酸离子在大孔径胶中移动时阻力小，移动速度快，当接近小孔径的分离胶时，遇到的阻力大，移动速度减慢而使样品浓缩，形 成一条狭窄区带，以减少电泳过程中的谱 带扩散。浓缩胶与分离胶的pH值不同也呵 以强化样品的浓缩作用。浓缩胶的作用是有堆积作用，凝胶浓度较小，孔径较大，把较稀的样品加在浓缩胶上，经过大孔径凝胶的迁移作用而被浓缩至一个狭窄的区带。当样品液和浓缩胶选pH6.8的TRIS/HCL缓冲液，电极液选TRIS/甘氨酸。电泳开始后，HCL解离成氯离子，甘氨酸解离出少量的甘氨酸根离子。蛋白质带负电荷，因此一起向正极移动，其中氯离子最快，甘氨酸根离子最慢，蛋白居中。电泳开始时氯离子泳动率最大，超过蛋白，因此在后面形成低电导区，而电场强度与低电导区成反比，因而产生较高的电场强度，使蛋白和甘氨酸根离子迅速移动，形成以稳定的界面，使蛋白聚集在移动界面附近，浓缩成一中间层。大大提高了电泳的灵敏度。
