紫外分光光度计实验考核 紫外可见分光光度计的性能指标调校实验中，如何进行光度准确度校正？

紫外分光光度计与紫外可见分光光度计的区别是什么？ 紫外分光光度计与紫外可见分光光度计的区别：1、测量的范围不同：（1）紫外分光光度计量程为200nm~600nm间（包括部分可见光）。（2）紫外可见分光光度计量程为200nm~1000nm。2、所用灯不同：（1）紫外光区通常用氢灯或氘灯。（2）见光区通常用钨灯或卤钨灯。3、原理不同：（1）紫外分光光度计，就是根据物质的吸收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。（2）紫外-可见分光光度计是基于紫外可见分光光度法原理，利用物质分子对紫外可见光谱区的辐射吸收来进行分析的一种分析仪器。扩展资料紫外-可见分光光度计的结构与功能：由光源、单色器、吸收池、检测器和信号显示系统五大部分组成。（1）光源：是提供符合要求的入射光的装置，有热辐射光源和气体放电光源两类。热辐射光源用于可见光区，一般为钨灯和卤钨灯，波长范围是350~1000nm；气体放电光源用于紫外光区，一般为氢灯和氘灯，连续波长范围是180~360nm。（2）单色器：功能是将光源产生的复合光分解为单色光和分出所需的单色光束，它是分光光度计的心脏部分。（3）吸收池：又称比色皿，供盛放试液进行吸光度测量之用，其底及两侧为毛玻璃，另两面为光学透光面，为减少光的反射损失，吸收。关于紫外分光光度计的使用 都可以.第一个方法其实等价于第二个方法.因为空白实验中样品中会比蒸馏水多一些溶质，因此吸光值会高于蒸馏水，需要减掉.因此，等于第二个方法.如何用紫外分光光度计测DNA浓度？ 实验原理DNA/RNA在260nm处有最大的吸收峰，蛋白质在280nm处有最大的吸收峰，盐和小分子则集中在230nm处。因此，可以用260nm波长进行分光测定DNA浓度，OD值为1相当于大约50μg/ml双链DNA。如用25px光径，用H2O稀释DNA/RNA样品n倍并以H2O为空白对照，根据此时读出的OD260值即可计算出样品稀释前的浓度：DNA（ug/ml）=50×OD260读数×稀释倍数。RNA（ug/ml）=40×OD260读数×稀释倍数。DNA/RNA纯品的OD260/OD280为1.8或2.0，故根据OD260/OD280的值可以估计DNA的纯度。若比值较高说明含有RNA，比值较低说明有残余蛋白质存在。OD230/OD260的比值应在0.4-0.5之间，若比值较高说明有残余的盐存在.本实验室机器显示是OD260\\OD230，则比值应在2-2.5之间，偏小则说明有残余盐剩余。实验步骤1.将制备的DNA悬浮溶解于TE缓冲液中[pH8.O，1Ommo1/L的Tris缓冲液，内含〈1mmol/LEDTA〉]或悬浮溶解在灭菌水中(依据DNA含量加水)。2.用可扫描的紫外分光光度计测定制备的DNA/RNA的紫外吸收曲线，测定OD260和OD280，并计算比值：OD260/OD280，纯DNA的此比值约为1.8～2.0。纯RNA的此比值约为大于2.0。3.根据：每毫升1微克的纯DNA的OD260值=0.020，计算所得DNA的纯度；每毫升1微克的纯RNA的OD260值=0。紫外可见分光光度计的性能指标调校实验中，如何进行光度准确度校正？ 【】可见分光光度计的性能指标，在其鉴定规程（JJG178）里，只有波长准确度、透视比准确度的鉴定项目。没有光度准确度的检定项目。【】对于吸光度的建议，有的指教给出的检定方法是：1、紫外区：采用0.0600g/L的K2Cr2O7溶液，用c（1/2H2SO4）0.005mol/L为参比，给出235（0.748）、257（0.865）、313（0.292）、350（0.640）nm（A值）的波长（吸光度值）。要求测定相对误差小于1%；2、可见区：采用20.00g/L的CuSO4溶液，用c（H2SO4）1+100为参比，给出650（0.224）、700（0.527）、750（0.817）nm（A值）的波长（吸光度值）。要求测定相对误差小于1%；

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