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PCR产物跑电泳,泳道上有小月牙形痕迹是怎么回事 蛋白胶有拖尾是怎么回事

2020-10-12知识16

剖腹产三年每次来例假为什么伤口会疼? 这个可能还是之前的伤口,局部的组织瘢痕形成,有增生的问题,那么会导致一些敏感的问题,另外的话,月经问题,可能导致体内激素的水平变化,那么也是可能的了,这个局部的。

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DNA琼脂糖凝胶电泳出现拖尾的原因是什么?

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聚丙烯酰胺凝胶电泳中电极安装为什么是上负下? 11.扫描。扫描操作见扫描仪的使用说明。编辑本段注意事项 1.在加过硫酸铵和TEMED之前溶液最好抽气,防止溶解在溶液里的分子氧在聚合时产生气泡使胶不均一。2.过硫酸铵和。

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PCR产物跑电泳,泳道上有小月牙形痕迹是怎么回事有“尾巴”朝上和朝下两张情况。“尾巴”朝上:如果尾巴是弥散的,像雾一下,而你的目的条带又比较直,那么可能是你拿来作为模板的DNA加多了,而如果目的条带弯成了很明显的“微笑状”,那么可能是你的PCR产物太浓了。如果尾巴不是弥散的,而是有一条一条的杂带,那么可能是你的PCR不特异,需要提高退火温度或者换引物。“尾巴”朝下:朝下说明目的条带下面的“尾巴”比目的条带要小,这种情况一般不多见,多数是因为PCR产物降解造成的。模板里的RNA一般不会产生拖尾,大部分都降解了,或者含量比较低。建议下次把图拍了放上来,没图只能这样分析了~

请教sds-page高手 sds-page常见问题:⒈ 配胶缓冲液系统对电泳的影响?在SDS-PAGE不连续电泳中,制胶缓冲液使用的是Tris-HCL缓冲系统,浓缩胶是pH6.7,分离胶pH8.9;。

DNA拖尾现象是什么原因 原因有以下:1、可以考虑是不是样品不纯,目的产物与杂带相差不大,所以要多跑一段时间才有尾巴。参考marker,marker应该不会有。如果有的话说明配胶有问题。2、琼脂糖检测DNA一般去1~5微升原液,加2微升溴酚蓝便可,注意上样浓度;3、可能是原液浓度太大造成的;4、可能DNA已降解。5、在提取前对样品进行一定的脱腐处理呀。很简单。有一种TENP buffer,文献中查的到的。6、DNA降解避免核酸酶污染。7、DNA上样量过多,可以减少凝胶中DNA上样量。8、所用电泳条件不合适,可以将电泳时电压不应超过20V/cm,温度℃,巨大DNA链,温度应℃,核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力。9、DNA样含盐过高,可以在电泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐。10、有蛋白污染,可以采用电泳前酚抽提去除蛋白。11、DNA变性,电泳前勿加热,用20mM NaCl缓冲液稀释DNA

琼脂糖凝胶电泳跑的DNA为什么会拖尾 由于酶量过多或酶的质量差,dNTP浓度过高,Mg2+浓度过高,退火温度过低,循环次数过多,而造成PCR的非特异性产物 过多。对策:减少Taq酶的量,或调换另一来源的酶;减少dNTP的浓度;适当降低Mg2+浓度;增加模板量,减少引物的用量,减少循环次数,提高退火温度。琼脂糖的熔点在62?65°C之间,融化后在37°C下可维持液态数小时,30°C时凝固成胶。多用于对染色体DNA在凝胶内进行原位酶切及DNA片段回收。琼脂糖凝胶 由于孔径大常用于大分子蛋白质、DNA的分离。扩展资料:琼脂糖凝胶是依靠糖链之间的次级链如氢键来维持网状结构,网状结构的疏密依靠琼脂糖的浓度。一般情况下,它的结构是稳定的,可以在许多条件下使用(如水,pH4-9范围内的盐溶液)。琼脂糖凝胶在40℃以上开始融化,也不能高压消毒,可用化学灭菌活处理。把琼脂糖,即几乎不含硫酸根的主要成分为多糖的琼脂,溶于热水,冷却制成的凝胶。制成的小颗粒用于凝胶过滤。参考资料来源:-琼脂糖凝胶

载体酶切产物电泳时检测胶上有条带,回收胶上却降解了,请教各位大虾这是怎么回事? 一片亮,一般是样品处理或者配胶的时候不注意,混入了一些内切酶,或是电泳温度高,导致核酸降解,尤其是跑RNA电泳,很容易这样.建议用新胶,新TBC(TAC)重新跑一次,样品用醋酸铵重新纯化,电泳槽用缓冲液冲洗多次再用.另外.

谁能总结以下SDS-PAGE电泳常见问题的分析 哈哈,我做过这个论文哈。1.配胶缓冲液系统对电泳的影响?在SDS-PAGE不连续电泳中,制胶缓冲液使用的是Tris-HCL缓冲系统,浓缩胶是pH6.7,分离胶pH8.9;而电泳缓冲液使用的Tris-甘氨酸缓冲系统.在浓缩胶中,其pH环境呈弱酸性,因此甘氨酸解离很少,其在电场的作用下,泳动效率低;而CL离子却很高,两者之间形成导电性较低的区带,蛋白分子就介于二者之间泳动.由于导电性与电场强度成反比,这一区带便形成了较高的电压剃度,压着蛋白质分子聚集到一起,浓缩为一狭窄的区带.当样品进入分离胶后,由于胶中pH的增加,呈碱性,甘氨酸大量解离,泳动速率增加,直接紧随氯离子之后,同时由于分离胶孔径的缩小,在电场的作用下,蛋白分子根据其固有的带电性和分子大小进行分离.所以,pH对整个反应体系的影响是至关重要的,实验中在排除其他因素之后仍不能很好解决问题的情况,应首要考虑该因素.2.样品如何处理?根据样品分离目的不同,主要有三种处理方法:还原SDS处理、非还原SDS处理、带有烷基化作用的还原SDS处理.1)还原SDS处理:在上样buffer中加入SDS和DTT(或Beta巯基乙醇)后,蛋白质构象被解离,电荷被中和,形成SDS与蛋白相结合的分子,在电泳中,只根据分子量来分离.一般电泳均按这种方式处理,样品稀释。

电泳DNA时,拖尾现象很严重,造成这种现象的原因有哪些? 电泳出现拖尾现象,英文成为smear,就是弥散.其原因,主要从以下两个方面考虑:1、PCR产物自身原因:往往由于酶量过多或酶的质量差,dNTP浓度过高,Mg2+浓度过高,退火温度过低,循环次数过多,而造成PCR的非特异性产物 过多.对策:①减少Taq酶的量,或调换另一来源的酶.②减少dNTP的浓度.③适当降低Mg2+浓度.④增加模板量,减少引物的用量,减少循环次数,提高退火温度.2、电泳体系的问题:(1)电泳缓冲液TAE或者TBE的污染,建议更换缓冲液.(2)上样时样品漂了,建议增加上样缓冲液的用量,以及小心加样.(3)电压太高.(4)适当把你的胶的浓度加大.(根据你的片断大小而定)(5)观察你的marker是否也存在拖尾现象,作为对照.

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