琼脂糖凝胶电泳使用什么染色?需要注意什么问题? 琼脂糖凝胶电泳的染料有许多种,近几年较常用的有:EB-溴乙锭,EB有较大毒性,可致癌,所以使用时一定要万分小心。EB染色的背景较强。SYBR Green-也叫荧光绿如蓝,低毒性,但检测灵敏度没有EB高。GelRed-号称无毒,无皮肤渗入型,有伤口就不好说了。背景荧光弱,但加多了容易出现拖带。由于在市场上价格较高,所以有出现很多仿冒货,买时要擦亮眼睛。
聚丙烯酰胺凝胶电泳跑大板胶后为何染色(银染)不均匀,什么原因?谢谢 因为染色的时候没有将胶体在银染液中铺开,重叠的地方就会出现银染不均匀的现象。摇床如果摇摆的幅度不大,则要自行震荡铺开。多块胶体注意尽量不要重叠在一起,也会出现胶体出现花纹的现象。
SDS-PAGE电泳跑不出条带 染色后,当然还需要脱色液(有乙醇、醋酸)脱色,不脱色的话全是蓝色,不能区分条带.脱色后,条带才能显示出来.在跑SDS-PAGE时,需要点Marker,正常情况在染色、脱色后能至少看到Marker的条带.如果Marker都没有,那就是电泳问题了.
聚丙烯酰胺凝胶电泳跑大板胶后为何染色(银染)不均匀,什么原因?
琼脂糖凝胶电泳实验失败原因?? 可能性太多了。1.你跑胶一般都要放MARKER或者叫DNA LADDER吧,这个MARKER除外对DNA标记大小以外,还可以用来监控ELECTROPHORESIS的质量,如果MARKER显示而DNA没显示,说明ELECTROPHORESIS正常而DNA有问题,如果MARKER和DNA都没有显示,说明是你的电永出现了问题。ELECTROPHORESIS的可能问题有,1.ELECTROPHORESIS BUFFER浓度问题,2.BUFFER太陈旧了从而失效 3.跑过了(根据SIZE来看)2.如果证明是DNA复制也就是PCR的问题,可能性就太多了。具体包括你所使用的PCRBUFFER:浓度问题(需要1X),盐析问题(有时候放置太久其中的SALT会析出,溶解不透彻就会失效),氯化镁浓度问题。DDNTP:浓度问题(可能配得浓度不够),陈旧性问题。TAQ:你的酶有可能失效。PRIMER问题:你的PRIMER可能NOT WORK。也可能你的ANNEALING TEM有问题,初次使用PRIMER的时候建议作温度的GRADIANT TEST,测试最佳ANNEALING TEM。PRIMER也可能太陈旧了,浓度或高或低。PRIMER容易行程DIMER。PCR PROGRAMME的设置问题:这个最简单,建议仔细过一遍。总之,如果是PCR的问题,建议每次保持其他不变,只改变其中的一项来把问题找出来,另外提醒你最好要作POSITIVE 和NEGATIVE CONTROL。
DNA电泳后,与buffer和染色剂反方向跑可能是什么原因?DNA是PCR扩增之后的。做了两边,都加了MARK。第一次,做完发现MARK都没有,但是电泳反方向 上有亮条带,我就怀疑DNA。