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影响限制性内切核酸酶活性的因素 限制性内切酶缓冲液

2020-10-05知识16

限制性内切酶缓冲液takala通用缓冲液中都能酶切吗 1.NEB 酶限制性内切酶目片段特异性序列进行识别与酶切;2.Buffer作用维持反应体系酸碱度稳定感觉这样的提问没有意义建议自己下去查查资料

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限制性内切酶的缓冲液有哪几种? 限制性内切酶的标准缓冲液包括氯化镁、氯化钠或氯化钾、Tris:HCl、巯基乙醇或二硫苏糖醇(DTT)以及牛血清白蛋白(BSA)等。不同的限制性内切酶对NaCl浓度的要求不同,据此可分为高盐、中盐和低盐缓冲液,在进行双酶切或多酶切时,若这些酶可在同种缓冲液中切割效果良好,则几种酶可同时酶切;若这些酶所要求的缓冲液有所不同,可采用以下两种方法进行消化反应:先用要求低盐缓冲液的限制性内切酶消化DNA,然后补足适量的NaCl,再用要求高盐缓冲液的限制酶消化;先用一种酶进行酶切,然后用乙醇沉淀酶切产物,再重置于另一缓冲液中进行第二次酶切。

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如何避免星号活性 在非标准条件下,有些内切酶可在与其识别序列相似但不完全相同的位点发生切割反应。这种非特异性的切割即所谓的“星号活性”。研究表明,星号活性是限制性内切酶的普遍特征,且任何一种内切酶在特定极端条件下都会产生这种非常规序列切割。可能引起星号活性的因素之一:甘油浓度过高(5%V/V)内切酶均贮存于50%的甘油中,因此内切酶的加入量不应该超过总体积的10%。建议使用50ul标准反应体系,这样可以减少蒸发,蒸发可引起甘油浓度升高并导致星号活性。可能引起星号活性的因素之二:酶/DNA浓度比过高(100units/ug DNA)使用尽量少的酶,这样可以避免过度消化,也可以降低甘油浓度。可能引起星号活性的因素之三:非最适缓冲液 尽量使用推荐的缓冲液,缓冲液中不同的离子浓度和pH值可导致星号活性。可能引起星号活性的因素之四:反应时间过长 使用尽量短的时间完成消化。长时间的温育可导致星号活性,也可导致蒸发。可能引起星号活性的因素之五:有机溶剂(eg.DMSO、乙醇、乙二醇、乙酰二甲胺、二甲基甲酰胺)如果可以,反应中不应有任何有机溶剂,DNA制备时残留的乙醇会导致星号活性。可能引起星号活性的因素之六:其他二价阳离子替代了Mg2+应当使用Mg2+作为反应中。

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符合PCR反应条件的一项是(  ) 考点:PCR技术的基本操作和应用 专题:分析:PCR全称为聚合酶链式反应,是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术.PCR技术的原理是DNA复制,需要的条件有:模板DNA(.

限制性核酸内切酶切割的原理和方法 100分在线等,急啊。希望大神解答的全一点,因为要作为资料交上去。谢谢!以DNA限制性核酸内切酶为例 1DNA限制性内切酶相关简介编辑 生物体内能识别并切割特异的双链DNA。

在限制性核酸内切酶酶切缓冲液中加入BSA的作用与机制分别是什么? 作用是保护限制性核酸内切酶的活性。nbsp;nbsp;机制是通过提高反应体系中蛋白质的浓度,防止限制性核酸内切酶失活。

限制性内切酶的酶解反应最适条件各不相同,大多数酶切缓冲液最适反应温度为() A.28

限制性核酸内切酶中为什么要加缓冲液 为什么从基因文库中获取目的基因不需要限制性核酸内切酶?构建重组子的时候为了防止载体自身环化,提高转化率,常用两种不同的内切酶切割载体,形成自身不能互补的缺口。获取目的基因的时候,反之。请采纳~

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