分子克隆步骤 (1)DNA片段的制备：常用以下方法获得DNA片段：①用限制性核酸内切酶将高分子量DNA切成一定大小的DNA片段；②用物理方法(如超声波)取得DNA随机片段；③在已知蛋白质的氨基酸。
质粒DNA的限制性内切酶酶切分析哪里会有介绍？生物方面知识在哪里可以了解 限制性核酸内切酶：是一类能识别双链DNA分子特异性核酸序列的DNA水解酶。它是基因工程中用于体外剪切基因片段的重要工具酶。上世纪七十年代，当人们在对噬菌体的宿主特异性的限制-修饰现象进行研究时，首次发现了限制性内切酶。首批被发现的限制性内切酶包括来源于大肠杆菌的EcoR I和EcoR II，以及来源于流感嗜血杆菌(Heamophilus influenzae)的Hind II和Hind III。这些酶可在特定位点切开DNA，产生可体外连接的基因片段。研究者很快发现内切酶是研究基因组成、功能及表达非常有用的工具。这方面的知识可以到生物帮那里了解，生物帮，专业的生物技术、生命科学门户网站。致力提供各种生物制剂试剂、实验抗体、仪器耗材、医疗设备等产品交易信息，提供生物技术知识方法文档、生物医药等领域的资讯，楼主有空可以去那里看下 寄主控制的限制与修饰现象限制与修饰系统是细菌细胞的一种防卫手段。各种细菌都能合成一种或几种能够切割DNA双链的核酸内切酶，它们以此来限制外源DNA存在于自身细胞内，但合成这种酶的细胞自身的DNA不受影响，因为这种细胞还合成了一种修饰酶，对自身的DNA进行了修饰，限制性酶对修饰过的DNA不能起作用。这种现象被称为寄主控制的限制与修饰现象。限制性。
克隆到底是怎么回事？ 恩，将A羊的受精卵的细胞核除去，导入B羊的体细胞的细胞核，这样受精卵就会根据体细胞的细胞核里的遗传物质制造蛋白质，这样形成的性状就与B羊一样，当然，也不完全相同，。
DNA的限制性酶切及电泳分析实验方法. 1.反应体系的建立：⑴ 在一无菌1.5 ml Eppendorf管中加入：？无菌双蒸水 7 μl？10×酶切缓冲液 2 μl？质粒DNA(100 ng/μl)10 μl？EcoRⅠ(5 U/μl)1 μl？总体积为20μl⑵ 轻轻混匀，12000 rpm离心5 sec。2.37 ℃水浴1 h。3.将Eppendorf管置65 ℃水浴中10 min，通过加热使酶失活以终止反应。4.12000 rpm离心5 sec，将管盖及管壁上的水离下。5.取10 μl消化产物，与2 μl 6×上样缓冲液混匀，琼脂糖凝胶电泳检测消化效果，电泳条件：约100 V 30～60 min。6 结果观察。操作注意事项：1.吸样量一定要准确2.为了不使酶污染而导致浪费，最后才加酶3.要求在冰上操作，并充分混匀，4.开启Eppendorf管时，手不要接触到管盖内面，以防污染。5.样品在37 ℃与65 ℃保温时，将离心管盖严，以防水进入管内造成实验失败。限制性内切酶酶解中常见的问题和原因1.DNA完全没有被限制性内切酶切割：①限制性内切酶失活；②DNA不纯，含有SDS、有机溶剂、EDTA等；③非限制性内切酶最佳反应条件；④酶切位点被修饰；⑤DNA上不存在该酶的识别顺序。2.DNA切割不完全：①限制性内切酶活性下降或稀释不正确；②DNA不纯或反应条件不佳；③酶切位点被修饰；④部分DNA溶液粘在管壁上；⑤酶切后DNA粘末端退火。。
DNA分子的限制性内切酶消化操作流程，限制性内切酶对DNA消化的方案
