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质粒pcr条带拖尾现象严重,出现好几次,求解释 质粒跑胶图带亮拖尾是浓度高

2020-10-02知识10

以质粒作为模板,pcr出现拖尾现象,为什么? 没有具体描述,只能给出几个猜测.你先看看marker跑得好不好.marker也不好的话:1.跑胶时电压太高2.染料问题3.胶没做好如果marker没有问题的话:1.loading buffer 可能有细菌污染2.pcr问题

质粒pcr条带拖尾现象严重,出现好几次,求解释 质粒跑胶图带亮拖尾是浓度高

为什么pcr的时候,DNA模板浓度高了,会有拖尾? 因为pcr利用一种DNA聚合酶来延伸结合在待定序列模板上的引物。DNA模板纯度不纯的时候,会对PCR起抑制作用。PCR反应中,模板只要1ng就可以,所以模板浓度不要太高。直到掺入一种链终止核苷酸为止。每一次序列测定由一套四个单独的反应构成,每个反应含有所有四种脱氧核苷酸三磷酸(dNTP)。并混入限量的一种不同的双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)。由于ddNTP缺乏延伸所需要的3-OH基团,使延长的寡聚核苷酸选择性地在G、A、T或C处终止。扩展资料:DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋成单链,在DNA聚合酶的参与下。根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。在实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,加入设计引物,DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。但是,DNA聚合酶在高温时会失活,因此,每次循环都得加入新的DNA聚合酶,不仅操作烦琐,而且价格昂贵,制约了PCR技术的应用和发展。耐热DNA聚合酶-Taq酶的发现对于PCR的应用有里程碑的意义,该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活,不需要每个循环加酶,使PCR技术变得非常简捷、同时。

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质粒pcr条带拖尾现象严重,出现好几次,求解释 拖尾在生物专业词汇叫做smear。造成此的原因有多种。一般来讲,有以下几点:1,引物设计不佳,造成了拖尾现象。。

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质粒跑电泳,拖尾很严重,是什么原因

大肠转化后提的质粒,跑电泳出现3条带,求高人解释每条带分别是什么?(第一列是空质粒) 质粒DNA分子具有三种构型:共价闭合环DNA(cccDNA,SC构型)、开环DNA(OC构型)和线性分子(L构型)。在细菌体内,质粒DNA是以负超螺旋构型存在的。在琼脂糖凝胶电泳中不同构型的的同一种质粒DNA,尽管分子量相同,但具有不同的电泳迁移率。其中跑在最前沿的是共价闭合DNA,其后依次是线性DNA和开环DNA,其原因是共价闭合的DNA其空间位阻最小,所以跑得最快。而开环DNA空间位阻最大,所以跑得最慢。不过并不是每次提取的质粒都有三条带,两条带的情况也很多见,如你的空质粒。

提取DNA后为什么要跑胶 通过跑胶看看提取的DNA的长度,有没有很多断裂(跑胶后表现为拖尾严重),以及浓度(条带亮不亮),有没有RNA污染(表现为100bp一下还有一团一团的条带)

质粒DNA酶切电泳图怎么分析(第二条带为质粒,第三条带为酶切片段,由于实验时没有PCR,所以只有两条带) 能具体说说你这第二孔和第三孔分别点的什么样,另外你的质粒有没有连着外源基因,是单酶切连的,还是双酶切连的。根据你的质粒大小,和外源基因大小,对照旁边的marker,你就知道每条带是什么了,但是你这第一个孔有三条亮带,做酶切也应该只是两条,另外第三孔是单一亮带不该是做的酶切,除非用的双酶切连接的基因然后单酶切跑的胶,但是比第二孔上面那两条亮带要小,应该也不是带基因的质粒,所以得看看你这两个孔分别点的是什么样品,分别做的什么处理,质粒的大小和外源基因的大小,还有Marker是哪个,才好分析。

质粒pcr条带拖尾现象严重,出现好几次,求解释? 看起来样品加得太多了,有三分之一就足够了。应该有个marker,好看看那条亮带是什么。如果是你要的产物就好。

质粒pcr条带拖尾现象严重,出现好几次,求解释 拖尾在生物专业词汇叫做smear。造成此的原因有多种。一般来讲,有以下几点:1,引物设计不佳,造成了拖尾现象。2,PCR中DNA浓度加的太多,造成了拖尾。3,mg2+浓度加的太高,造成了拖尾。4,跑胶电压不合适,造成了拖尾。5,退火温度不合适,造成了拖尾。这些都可能造成拖尾,请认真分析之。谢谢。

电泳DNA时,拖尾现象很严重,造成这种现象的原因有哪些? 电泳出现拖尾现象,英文成为smear,就是弥散.其原因,主要从以下两个方面考虑:1、PCR产物自身原因:往往由于酶量过多或酶的质量差,dNTP浓度过高,Mg2+浓度过高,退火温度过低,循环次数过多,而造成PCR的非特异性产物 过多.对策:①减少Taq酶的量,或调换另一来源的酶.②减少dNTP的浓度.③适当降低Mg2+浓度.④增加模板量,减少引物的用量,减少循环次数,提高退火温度.2、电泳体系的问题:(1)电泳缓冲液TAE或者TBE的污染,建议更换缓冲液.(2)上样时样品漂了,建议增加上样缓冲液的用量,以及小心加样.(3)电压太高.(4)适当把你的胶的浓度加大.(根据你的片断大小而定)(5)观察你的marker是否也存在拖尾现象,作为对照.

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