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用琼脂糖凝胶电泳分析核酸(DNA和RNA)有哪些影响因素? dna配胶槽

2020-09-30知识23

琼脂糖凝胶怎么配制? 把琼脂糖,即几乎不含2113硫酸根5261的主要成分为多糖的4102琼脂,溶于热水,倒入玻璃1653杯中,冷却制成的凝胶。融化后在37°C下可维持液态数小时,30°C时凝固成胶。即完成琼脂糖凝胶的配置。制成的小颗粒用于凝胶过滤,适于用sephadex不能分级分离的大分子的凝胶过滤,若使用5%以下浓度的凝胶,也能够分级分离细胞颗粒、病毒等。利用其吸附性小的特点,有时用它代替琼脂、以作为免疫电泳或凝胶内沉降反应的支持物。扩展资料:琼脂糖分为一般琼脂糖和经化学修饰后熔点降低的低熔点琼脂糖,琼脂糖的熔点在62?65°C之间,多用于对染色体DNA在凝胶内进行原位酶切及DNA片段回收。琼脂糖凝胶由于孔径大常用于大分子蛋白质、DNA的分离。琼脂由琼脂糖和琼脂果胶两部分组成:作为胶凝剂的琼脂糖是不含硫酸酯的非离子型多糖,是形成凝胶的组分,其大分子链链节着1,3苷键交替相连的β-D-半乳糖残基和3,6-内醚-L-半乳糖残基。而琼脂果胶是非凝胶部分,是带有硫酸酯、葡萄糖醛酸和丙酮酸醛的复杂多糖,也是商业提取中力图去掉的部分。商品琼脂一般带有2%~7%的硫酸酯,0%~3%的丙酮酸醛及1%~3%的甲乙基。在工业上的琼脂 色泽由白到微黄,具有胶质感,无气味或有轻微的特征。

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琼脂糖凝胶电泳的制胶槽和电泳槽 向左转|向右转向左转|向右转有红黑电线的是电泳槽,是制好胶点完样之后用来跑电泳的。另外一个是制胶槽,就是用来制备琼脂糖凝胶的,相当于是个模具。将琼脂糖溶解熬好之后倒在里面让其凝固,插的梳子是让凝胶上产生点样孔。

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求助:琼脂糖各浓度对应的片段大小 琼脂糖各浓度对应的片段大小一般都会选择1%琼脂糖凝胶,90-120V电压都没有问题,如果要分离片段的话,片段相差不大建议调低电压,增加琼脂糖凝胶浓度,跑胶时尽zd量让溴酚蓝跑的越低越好,只要回不把想要的片段跑出去就好.本人尝试过2%琼脂糖凝胶,40V,跑了近三个小时啊,分开了相差约50bp的两个片段.目的产物大小80BP的片段,你可以用2.0%的琼脂糖答凝胶进行电泳,琼脂糖以及TAE的量的多少,首先与你跑得样品的个数有关,因为你样品的个数决定了你胶槽的体积,胶槽的体积决定了你的TAE的量,决定了琼脂糖的量,比如说你胶槽的体积是20ml,那么你要配2.0%的胶,就需要20ml的TAE和0.4g的琼脂糖.

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如何对提取的DNA纯化 质粒DNA的提取、纯化和电泳检测摘要本实验通过碱变性法提取E.coli DH5α(pUC19)的质粒DNA,并且通过一系列的分离纯化技术将其质粒DNA与染色体DNA、RNA、蛋白质等杂质分开从而得到纯化的质粒DNA分子。通过琼脂糖凝胶电泳可以通过DNA条带的位置来大致判断其分子大小,也可以将实际电泳的结果和理论结果相对比,分析差异产生原因,从而完善实验方法,严谨实验步骤。关键词碱变性法分离纯化技术琼脂糖凝胶电泳引言质粒是细菌细胞中与主染色体共存、可自主复制的一段大多数呈环形的DNA。细菌质粒的相对分子质量大小从1kb至200kb以上不等。一些质粒永远独立于染色体之外,另外一些质粒在一定条件下会可逆地整合到寄主染色体上,随着染色体的复制而复制,并通过细胞分裂传递到后代。质粒在基因工程中质粒常被用做基因的载体。目前,已发现有质粒的细菌有几百种,已知的绝大多数的细菌质粒都是闭合环状DNA分子(DNA)。质粒在基因工程中是一类重要的载体,其作用主要是携带一些基因片段(可以是编码基因,也可以是调控区等),在细胞内环境中进行表达或参与通路的相互作用,通过将质粒转化到宿主细胞可以探究基因相互作用关系,取得蛋白产物,实现特定基因片段的克隆等。总之,质粒在生物科学。

印迹杂交的方式简介 主要用于分析RNA,包括正向杂交、反向杂交、斑点杂交。正向Northern杂交是将待测RNA固定在纤维膜上,用特异序列DNA探针与其杂交,再显影观察。反向Northern杂交是将特异序列DNA固定在纤维膜上,用待测RNA做成探针与其杂交,再显影观察。主要用于分析DNA,也包括正向杂交、反向杂交、斑点杂交。正向Southern杂交是将待测DNA固定在纤维膜上,用特异序列DNA探针与其杂交,再显影观察。反向Southern杂交是将特异序列DNA固定在纤维膜上,用待测DNA做成探针与其杂交,再显影观察。主要用于分析蛋白质,利用了抗原抗体特异性结合的原理。分为抗原法、夹心法、竞争法。抗原法是将待测抗原固定在膜上,加特异抗体与其结合、洗膜、显色、观察。夹心法是将一抗固定在膜上,加待测抗原、洗膜、加特异二抗、洗膜、显色、观察。竞争法是分对照和试验两组,对照组将特异抗原固定在膜上,实验组将待测抗原固定在膜上,都加入特异抗体,显色、观察。用于比较抗原的特异性。Northern印迹杂交(Northern blot)。这是一种将RNA从琼脂糖凝胶中转印到硝酸纤维素膜上的方法。DNA印迹技术由Southern于1975年创建,称为Southern印迹技术,RNA印迹技术正好与DNA相对应,故被称为Northern印迹。

跑DNA可以用预制胶吗 跑基因组,核酸电泳,用琼脂糖凝胶就可以,琼脂糖直接配0.8-3%这个范围都行,基因组的话,1%就可以。用不上预制胶。预制胶多数是用来跑蛋白的PAGE胶(聚丙烯酰胺凝胶),PAGE也可以用来跑核酸,效果更好,但是操作麻烦,对于小白来说还是琼脂糖更简单一些。琼脂糖自制非常简单,配1%的胶,加1g琼脂糖,加100ml水,微波炉融化,加入EB,倒在灌胶槽里冷却就可以了。琼脂糖直接找试剂公司买就可以。

怎么配置1%琼脂糖胶 1、制备1%琼脂糖凝胶(大胶用211370ml,小胶5261用50ml):称取0.7 g(0.5 g)琼脂糖置于锥形瓶中,加入70 ml(50ml)1×TAE,瓶口4102倒扣小烧杯.微波炉加1653热煮沸3次至琼脂糖全部融化,摇匀,即成1.0%琼脂糖凝胶液。2、胶板制备:取电泳槽内的有机玻璃内槽(制胶槽)洗干净,晾干,放入制胶玻璃板.取透明胶带将玻璃板与内槽两端边缘封好,形成模子.将内槽置于水平位置,并在固定位置放好梳子.将冷却到65℃左右的琼脂糖凝胶液混匀小心地倒入内槽玻璃板上,使胶液缓慢展开,直到整个玻璃板表面形成均匀胶层。3、室温下静置直至凝胶完全凝固,垂直轻拔梳子,取下胶带,将凝胶及内槽放入电泳槽中。添加1×TAE电泳缓冲液至没过胶板为止。扩展资料:储藏温度:常温商品名很多,常见的有,Sepharose(瑞典,pharmacia),Bio-Gel-A(美国Bio-Rad)等。琼脂糖凝胶是依靠糖链之间的次级链如氢键来维持网状结构,网状结构的疏密依靠琼脂糖的浓度。一般情况下,它的结构是稳定的,可以在许多条件下使用(如水,pH4-9范围内的盐溶液)。琼脂糖凝胶在40℃以上开始融化,也不能高压消毒,可用化学灭菌活处理。琼脂糖 Agarose,缩写为AG,是琼脂中不带电荷的中性组成成份,也译为琼胶素或琼胶糖。琼胶糖。

DNA跑胶具体步骤? 制胶、设置电泳系统(缓冲液、电源、电泳槽等)、DNA样品准备(DNA及DNA Marker+上样缓冲液)、加样、电泳、染色、UV检测分析等。

#聚丙烯酰胺凝胶#琼脂糖#电泳#质粒载体#蛋白电泳

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