如何用紫外分光光度计测DNA浓度
紫外吸收法测定蛋白质浓度的基本原理是什么？ 由于蛋白质中存在着含有共轭双键的酪氨酸和色氨酸，它们具有吸收紫外光的性质，其吸收高峰在280nm波长处，且在此波长内吸收峰的光密度值OD280nm与其浓度成正比关系，故可作为蛋白质定量测定的依据。本法操作简便迅速，且不消耗样品(可以回收)，多用于纯化之蛋白质的微量测定。主要缺点：1.当待测的蛋白质与标准蛋白质中的酪氨酸和色氨酸含量差异较大时，则产生—定误差（故要准确定量，必需要有待测蛋白.
如何用紫外吸收法测定DNA含量 首先，分光光度计测量的样品必须是均一的，摇匀后再测量结果会准确些。它是利用分光光度法对物质进行定量定性分析的仪器。核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸，单链、双链DNA，以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波长260 nm。每种核酸的分子构成不一，因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸，事先要选择对应的系数。如：1OD 的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA，30μg/ml的Olig。测试后的吸光值经过上述系数的换算，从而得出相应的样品浓度。测试前，选择正确的程序，输入原液和稀释液的体积，尔后测试空白液和样品液。然而，实验并非一帆风顺。读数不稳定可能是实验者最头痛的问题。灵敏度越高的仪器，表现出的吸光值漂移越大。事实上，分光光度计的设计原理和工作原理，允许吸光值在一定范围内变化，即仪器有一定的准确度和精确度。如Eppendorf Biophotometer的准确度≤1.0%(1A)。这样多次测试的结果在均值1.0%左右之间变动，都是正常的。另外，还需考虑核酸本身物化性质和溶解核酸的缓冲液的pH值，离子浓度等：在测试时，离子浓度太高，也会导致读数漂移，因此建议使用pH值一定、离子浓度较。
紫外可见分光光度法，用吸收系数法定量，公式是什么？ A=ECL C=A/ELA为吸收度；T为透光率；E为吸收系数，采用的表示方法是（E1％1cm），其物理意义为当溶液浓度为1%（g/ml），液层厚度为1cm时的吸收度数值；C为100ml溶液中所含。
紫外分光光度法测定蛋白质含量的方法有何优缺点受哪些因素的影响和限制 紫外分光光度法测定蛋白质含量的方法有何优缺点？受哪些因素的影响和限制？答：优点是：方法简单、灵敏、快速、高选择性，且稳定性好，不消耗样品，低浓度的盐类不干扰测定。
紫外分光光度法测溶液浓度？
紫外含量测定的方法学怎么做？ 目的：建立测定萘敏维滴眼液中维生素B12含量的方法。方法：采用紫外分光光度法，在361nm处测定维生素B12的含量。结果：复方制剂中其他组分及辅料不干扰测定，维生素Bn在12．0-32．01μg／ml浓度范围内与吸收度有良好的线性关系（r=0.9992），高、中、低3种浓度的平均回收率为99．53％-100．40％（n=5），ILSD为0．23％-0．86％。结论：该方法简便、快速、准确，适用于本品的质量控制。
紫外光吸收法测定蛋白质浓度时，为什么要同时测定280nm及260nm的吸光度 紫外吸收检测2113DNA浓度与纯度2007年11月13日5261 星期二 11：40目的：了解紫外吸收检测DNA浓度与纯4102度的原理，掌握测定方法.原理：1653 核酸的最大吸收波长为260nm，蛋白质为280nm，在波长260nm时，1OD值相当于双链DNA浓度为50μg/ml，单链 寡核苷酸的含量为30μg/ml，可以据此来计算核酸样品的浓度，还可通过测定在260nm和280nm的OD值的比值（OD260/OD280），估计核酸的纯度.纯净DNA的比值为1.8，RNA为2.0.若比值高于1.8说明DNA样品中的RNA尚未除 尽，若样品中含有酚和蛋白质将导致比值降低.270nm存在高吸收表明有酚的干扰.紫外分光光度法只能用于测定浓度 大于0.25μg/ml的核酸溶液，对浓度更小的样品，可采用荧光分光光度法.试剂与仪器：提取的质粒DNA，紫外分光光度仪.操作步骤：1)分光光度计先用水在260nm和280nm两个波长下校零.2)取质粒DNA样品2μl，用水稀释100倍，转入分光光度计的石英比色杯中.3)在260nm和280nm分别读出样品光密度值.如果样品浓度单位为μg/μl，则样品DNA浓度为OD 值的10倍，即如 OD260=0.1，则样品浓度即为1μg/μl.4)若OD260/OD280大于1.8，说明仍有RNA，可以考虑用RNA酶处理样品，若小于1.8，说 明样品中含有蛋白质或酚，应再用酚/氯仿抽提，以乙醇沉淀纯化。
