求问如何精确测定死时间和死体积？ 一般情况下在流动相中不保留的成分，出来的第一个峰就是死时间。因此，死体积=死时间X流量。死时间(t0)是液相色32313133353236313431303231363533e58685e5aeb931333332636336谱中的重要参数，其值的精确测定对分离条件的优化和色谱热力学研究具有重要意义。在反相色谱中．固定相极性较弱．流动相一般为强极性的水、甲醇、乙腈等．故通常采用极性更强的NaNO3或NH4No3作为标记物，进行死时间的测定。但由于标记物与固定相之间，存在着一定的相互作用．因此测定结果会与真实死时间有一定的偏离。通常以NaNO3等强极性溶质进行反相液相色谱中死时间测定时，其与固定相之问极弱的相互作用可以忽略不计。这种方法得到的死时间可以进一步用于色谱保留机理的热力学研究和分离条件的优化。高效液相色谱中死时间是个非常重要的基础参数。在进行色谱条件优化及定性鉴定时都需要用到。液相色谱中的基本理论与气相色谱相同，但液相色谱系统与气相色谱系统却有很大差别 如液体的扩散系数和料颗粒的孔体积，也包括填料颗粒间的孔隙体积．故影响死时间的因素也比气相色谱复杂得多。在色谱中测定死时间通常有两种方法，一是用所谓的无保留的探测物如脲嘧啶、D2O、某些无机盐等直接测定。
正相色谱柱与反相色谱柱的区别 色谱柱的安装：1、首先应确认柱和仪器的接头以及管路是否匹配.为减少死体积，进样阀、柱子、检测器之间的连接管路内径尽可能使用内径较小的管线，同时控制进样器、色谱柱和检测器之间连接管线的长度.安装色谱柱之前，确认流路系统中的溶剂是否正常.对分析较复杂的样品建议安装保护柱.2、为了使色谱柱与仪器系统达最佳的连接效果，应尽量使用与色谱柱接口相匹配的螺帽和锥形接头，如原来的接头长期匹配其他类型的色谱柱，建议在连接新色谱柱前应检查匹配情况，避免造成色谱柱的损坏或因色谱柱不匹配造成的漏液.3、使用PEEK 材料的通用接头，只需用手拧紧不需要特定扳手，使用压力为5000psi；使用温度不得超过100℃.流动相平衡：1、在进行样品检测前，至少使用20倍柱体积流动相使色谱柱充分平衡.流动相一定要使用色谱级别的溶剂.如使用水相的缓冲液应当天配制以保持新鲜避免细菌产生.2、流动相使用前需用微孔滤膜过滤，消除流动相中颗粒对色谱系统和色谱柱的损坏.缓冲液与其他流动相混合后应重新过滤避免溶解度变化造成产生新的沉淀.不应使用纯水作为流动相冲洗C18色谱柱，以免柱性能损坏（添加5％的有机溶剂冲洗色谱柱，同时可以达到对缓冲盐清洗的作用.还可以使色谱柱更容易平衡）.3。
HPLC怎么计算死时间，C18柱是什么类型的柱子？化学键合？离子交换？还是什么的？是全多孔固定相还是非多孔固定相？ 1.在HPLC分析中，死时间Tm表示了一个在高效液相色谱固定相上未被滞留组分的保留时间，由于高效液相色谱立法的多样性，很难找到像气相色谱那样选择空气或甲烷为测量死时间的。
