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氮蓝四唑可以测定超氧自由基吗 氮蓝四唑NBT法测超氧化物歧化酶的具体步骤

2021-04-28知识6

SOD(超氧化物歧化酶)活性测定 去文库,查看完整内容>;内容来自用户:wangningygSOD(超氧化物歧化酶)活性测32313133353236313431303231363533e58685e5aeb931333433646431定氮蓝四唑法一、原理超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)普遍存在动、植物的体内,是一种清除超氧阴离子自由基的酶,它催化下面的反应:反应产物H2O2可由过氧化氢酶进一步分解或被过氧化物酶利用。超氧化物歧化酶抑制氮蓝四唑(NBT)在光下的还原作用来确定酶活性的大小。在有氧化物质存在下,核黄素可被光还原,被还原的核黄素在有氧条件下极易被氧化而产生超氧阴离子,超氧阴离子可将氮蓝四唑还原为蓝色的甲腙,后者在560nm处有最大吸收。而SOD可清除超氧阴离子,从而抑制了甲腙的形成。于是光还原反应后,反应液蓝色愈深,说明酶的活性愈低,反之酶的活性俞高。据此可计算出酶活性的大小。二、材料、仪器设备及试剂(一)材料植物器官(花瓣、叶片等)(二)仪器设备冰箱、低温高速离心机、微量加样器(1mL、20μL、100μL)、移液管、精密电子天平、UV-752型紫外分光光度计、试管、研钵、剪刀、镊子、荧光灯(反应试管处照度为4000Lux或Lx)(三)试剂(1)0.05mol/L磷酸缓冲液(PH7.8)。(2)130mmol/L甲硫氨酸(Met)溶液:称1.9399。

SOD活性测定 最低0.27元开通文库会员,查看完整内容>;原发布者:淘不舍服饰店超氧化物歧化酶(SOD)活力测定POD过氧化物酶(英文:Peroxidase)广泛存在于植物体中,是活性较高的一种酶.它与呼吸作用,光合作用及生长素的氧化等都有关系.在植物生长发育过程中它的活性不断发生变化.一般老化组织中活性较高,幼嫩组织中活性较弱.这是因为过氧化物酶能使组织中所含的某些碳水化合物转化成木质素,增加木质化程度,而且发现早衰减产的水稻根系中过氧化物酶的活性增加,所以过氧化物酶可作为组织老化的一种生理指标.此外,过氧化物同工酶在遗传育种中的重要作用也正在受到重视.过氧化物酶能催化过636f70797a6431333433623764氧化氢氧化酚类,产物为醌类化合物,此化合物进一步缩合或与其他分子缩合,产生颜色较深的化合物.一、目的学习和掌握氯化硝基四氮唑蓝(NBT)光化还原法测定SOD活力的方法和原理,并了解SOD的作用特性。二、原理SOD是含金属辅基的酶。高等植物含有两种类型的SOD:Mn-SOD和Cu.Zn-SOD,它们都催化下列反应:由于超氧自由基(O2.-)为不稳定自由基,寿命极短,测定SOD活性一般为间接方法。并利用各种呈色反应来测定SOD的活力。核黄素在有氧条件下能产生超氧自由基负离子O2.-,当。

SOD酶的活力的测定 最低0.27元开通文库会员,查看完整内容>;原发布者:lucy杰仔实验材料与方2113法1主要试剂的配制1.0.05mol/L磷酸缓冲液5261(PBS,pH7.8):A母液:0.2mol/L磷酸氢二钠溶液:取Na2HPO4·12H2O(分子4102量1653358.14)71.7g;B母液:0.2mol/L磷酸二氢钠溶液:取NaH2PO4·2H2O(分量156.01)31.2g。分别用蒸馏水定容到1000ml。0.05mol/LPBS(pH7.8)的配制:分别取A母液(Na2HPO4)228.75ml,B母液(NaH2PO4)21.25ml,用蒸馏水定容至1000ml。2.130mmol/L甲硫氨酸(Met)溶液:称1.9399gMet用磷酸缓冲液定容至100ml。3.750μmol/L氮蓝四唑溶液:称取0.06133gNBT用磷酸缓冲液定容至100ml,避光保存。4.100μmol/LEDTA-Na2溶液:称取0.003721gEDTA-Na2,用磷酸缓冲液定容至1000ml。5.20μmol/L核黄素溶液:称取0.00753g核黄素用蒸馏水定容至1000ml,避光保存。6.K2Cr2O7溶液的配制:M(K2Cr2O7)×所要配制的浓度/2M(Cr)7.5%双氧水溶液:取30%的双氧水溶液25mL于200mL量筒中,加蒸馏水至150mL。现用现配。8.NaHS溶液的配制:精确称取0.056gNaHS,少量水溶解并使用容量瓶定容到100ml,定容后的溶液即为10mmol/L的H2S母液,在每次实验前现用现配,并使用蒸馏水稀释成实验所需的浓度。。

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