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taq聚合酶防止酶活性降低 TaqDNA聚合酶的校对活性

2021-04-28知识5

TaqDNA聚合酶是什么酶?其作用是什么? TaqDNA聚合酶 Taq DNA聚合酶是从一2113种水生栖热菌(Thermusaquaticus)yT1株分离提5261取的.yT是 一种嗜热真菌,能在70~75℃生4102长.该菌是1969年从美1653国黄石国家森林公园火山温泉中分离的。该酶基因全长2496个碱基,编码832个氨基酸,酶蛋白分子为 94KDa.其比活性为200000单位/mg.75~80℃时每个酶分子每秒钟可延伸约150个核苷 酸,70℃延伸率大于60个核苷酸/秒,55℃时为24个核苷酸/秒.温度过高(90℃以上)或过低(22℃)都可影响Taq DNA聚合酶的活性,该酶虽然在90℃以上几乎无DNA合成,但确有良好的热稳定性,在PCR循环的高温条件下仍能保持较高的活性.在92.5℃、95℃、97.5℃时,PCR混合物中的Taq DNA聚合酶分别经130min,40min和5~6min后,仍可 保持50%的活性,实验表明.PCR反应时变性温度为95℃~20sec,50个循环后,Taq DNA聚合酶仍有65%的活性.Taq DNA聚合酶的热稳定性是该酶用于PCR反应的前提条 件,也是PCR反应能迅速发展和广泛应用的原因.Taq DNA聚合酶还具有逆转录活性,其作用于类似逆转录酶.此活性温度一般为65~68℃,有Mn2+存在时,其逆转录活性 更高.TaqDNA聚合酶是Mg2+依赖性酶,该酶的催化活性对Mg2+浓度非常敏感.以活性程度 很低的鲑鱼精子。

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PCR扩增需要注意的点 1. 1.引物的质量是保证PCR特异性的关键,引物过长或过短均会使特异性降低,以18~30bp为宜;引物中C+G含量宜在50%左右;引物内部和引物之间不应含有互补序列;。

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