DNA或RNA样品不纯,用紫外分光光度计测定其浓度和纯度的准确性会受到影响,为什么? 紫外分光光度计测rna浓度

如何用紫外分光光度计测DNA浓度 首先，分光光度计测量的样品必须是均一的，摇匀后再测量结果会准确些.它是利用分光光度法对物质进行定量定性分析的仪器.核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能.可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸，单链、双链DNA，以及RN.如何用紫外分光光度计测DNA浓度？ 实验原理DNA/RNA在260nm处有最大的吸收峰，蛋白质在280nm处有最大的吸收峰，盐和小分子则集中在230nm处。因此，可以用260nm波长进行分光测定DNA浓度，OD值为1相当于大约50μg/ml双链DNA。如用25px光径，用H2O稀释DNA/RNA样品n倍并以H2O为空白对照，根据此时读出的OD260值即可计算出样品稀释前的浓度：DNA（ug/ml）=50×OD260读数×稀释倍数。RNA（ug/ml）=40×OD260读数×稀释倍数。DNA/RNA纯品的OD260/OD280为1.8或2.0，故根据OD260/OD280的值可以估计DNA的纯度。若比值较高说明含有RNA，比值较低说明有残余蛋白质存在。OD230/OD260的比值应在0.4-0.5之间，若比值较高说明有残余的盐存在.本实验室机器显示是OD260\\OD230，则比值应在2-2.5之间，偏小则说明有残余盐剩余。实验步骤1.将制备的DNA悬浮溶解于TE缓冲液中[pH8.O，1Ommo1/L的Tris缓冲液，内含〈1mmol/LEDTA〉]或悬浮溶解在灭菌水中(依据DNA含量加水)。2.用可扫描的紫外分光光度计测定制备的DNA/RNA的紫外吸收曲线，测定OD260和OD280，并计算比值：OD260/OD280，纯DNA的此比值约为1.8～2.0。纯RNA的此比值约为大于2.0。3.根据：每毫升1微克的纯DNA的OD260值=0.020，计算所得DNA的纯度；每毫升1微克的纯RNA的OD260值=0。752紫外分光光度计测RNA浓度的T值怎么这么小，只有0.1的原因我们用752紫外分光光度计测RNA浓度，样品稀释1000倍，但是最后测出的T值为什么这么小，T只有0.1，就算是加墨水也不可能那么小吧， 利用紫外分光光度计测得DNA或RNA浓度的结果比实际浓度一般 是偏高还是偏低？为什么？ 现在利用紫外分光光度仪测出来的DNA和RNA的浓度应该是比较准的了，利用琼脂糖凝胶电泳检测后也可以对dna和RNA的浓度进行定量分析，但是比较费时间，有条件的实验室都开始用紫外分光光度仪测DNA和RNA的浓度了。望采纳紫外可见分光光度计法测核酸含量有何优缺点 方便，灵敏，除了知道含量，还知道组成成分，比如od260/od280低了，就说明蛋白等杂志多了。但是，不知道质量，比如真核rna：跑胶的话有三条带，说明你的rna抽的不错，但是用分光光度计虽能测出rna含量高，但是我们不知道是不是被降解了；或者dna是不是断裂了~如何用紫外分光光度计测DNA浓度 首先，分光光度计测量的样品必须是均一的，摇匀后再测量结果会准确些。它是利用分光光度法对物质进行定量定性分析的仪器。。用分光光度计测DNA、RNA的浓度 最低0.27元开通文库会员，查看完整内容>；原发布者：ryp923用分光光度计测定质粒DNA的浓度一、目的熟练掌握分光光度法检测DNA纯度和浓度的方法。二、原理DNA或RNA链上碱基的苯环结构在紫光区具有较强吸收，其吸收峰在260nm处。波长为260nm时，DNA或RNA的光密度OD260不仅与总含量有关，也随构型而有差异。对标准样品来说，浓度为1μg/ml时，DNA钠盐的OD260＝0.02当OD260＝1时，dsDNA浓度约为50μg/mlssDNA浓度约为37μg/mlRNA浓度约为40μg/ml寡核苷酸浓度约为30μg/ml（youyu底物不同有差异）当DNA样品中含有蛋白质、酚或其他小分子污染物时，会影响DNA吸光度的准确测定。一般情况下同时检测同一样品的OD260、OD280和OD230，计算其比值来衡量样品的纯度。经验值：纯DNA：OD260/OD280≈1.8(＞1.9，表明有RNA污染；6，表明有蛋白质、酚等污染）纯RNA：1.7（时表明有蛋白质或酚污染；2.0时表明可能有异硫氰酸残存）若样品不纯，则比值发生变化，此时无法用分光光度法对核酸进行定量，可使用方案二的方法或其他方法进行估算。三、材料、试剂及器具1、材料提取的PUC19样品、PUC19标准样品2、试剂灭菌重蒸水，TE缓冲液四、操作步骤1、UV-240紫外分光光度计开机预热10min.2、用重蒸水。752紫外分光光度计测RNA浓度的T值怎么这么小，只有0.1的原因 有空白样对照吧，稀释倍数是不是太大了哦。

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