在MTT实验中要设置调零孔(培养基、MTT、二甲基亚砜).而在加入MTT孵育4h之后需要将调零孔中的液体全部吸尽再加DMSO?还是不吸去调零孔中的液体直接加DMSO呢? 处理孔吸弃,但是调零孔不吸弃?两个都不吸弃?你要明确下面两点再考虑怎么处理:(1)培养液中的血清对DMSO溶解甲臜结晶是有干扰的;(2)调零孔的作用是给所有处理孔一个空白底值;另外,实在不想吸弃的话,可以使用SDS-HCl-异丁醇三联溶解液.
我做的MTT为什么同一组的两孔差别那么大呢?做了两次都是这样。 博凌科为产生差别的原因有多种1.在加细胞时,细胞沉淀下来,导致两孔细胞数不同.我们通常用磁力转子对细胞缓慢搅拌,时刻保持细胞处于悬浮状态.2.96孔板在培养箱中,由于湿度不够,而培养箱由于具有一定的温度,使得边缘的孔水分蒸发较快,导致培养基中各种成分浓度变化增大,导致细胞状态 不同.对于这种现象,要保证培养箱中的湿度,减少开关培养箱的次数和时间.对于生长较快的细胞,例如每12小时到24小时就传代一次的细胞,应该起始浓度低一些,我一般是96孔板每孔加10 4个细胞,培养液每孔加200ul.有些细胞生长较慢,例如72小时才传代一次,或者是原代细胞,起始浓度应高一些,我一般是96孔板每孔加2X10 4个细胞,培养液每孔加200ul.
关于MTT实验中的调零孔 在MTT实验中要设置调零孔(培养基、MTT、二甲基亚砜)。而在加入MTT孵育4h之后需要将调零孔中的液体全部吸尽再加DMSO?还是不吸去调零孔中的液体。