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求助荧光定量PCR,我的实验组和对照组的目的基因CT值非常相近,但是两组内参基因的CT值相差5左右,正常吗 qpcr实验组ct值比对照组大

2021-04-23知识10

实时定量PCR的结果是怎样分析的 1、如果有2113标准曲线,按照标准曲线计算5261。2、一般都是相对量4102,则用delta delta CT方法来计算。3、举例1653如下:对照组基因A的CT值为20,内参(比如βactin)CT值15。实验组基因A CT值18,内参CT值14。4、首先算加样量:delta CT=15-14=1。2的1次方是2。也就是说实验组的加样量是对照组的2倍。基因A:delta CT=20-18=2。2的2次方是4。也就是说基因A的量在实验组是对照组的4倍。但是由于加样量是2倍,所以4处以2=2,最后的相对量是2倍。5、几点注意:必须确定扩增的特异性,只有相同目标的CT值才能相减(扩增效率有可能不同),2的某次方只是理论值,实际扩增效率低于2,最好不用Syber Green。扩展资料:PCR原理:1、PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。2、PCR由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成:①模板DNA的变性:模板DNA经加热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;③引物的延伸:DNA。

荧光定量数据处理时内参的CT值低于目的基因的CT值,那应该怎么进行处理啊?

我想问一下荧光定量PCR法用2-△△Ct计算相对定量的问题 你一次实验做的数据,内参可以得到几个CT值,目的基因也会得到几个.这样的话,根据平均的CT值,就会得到一个倍数(相对量).实验肯定不会只做一次吧,至少重复3次以上.这样就会得到3个以上的倍数了.3个以上的数值就可以算均数和标准差了.

#qpcr实验组ct值比对照组大

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