如何用紫外吸收法测定DNA含量？ 紫外分光光度法测dna含量

如何用紫外分光光度计测DNA浓度 首先，分光光度计测量2113的样品必须5261是均一的，摇匀后再测量结果会准确些。4102它是利用分光1653光度法对物质进行定量定性分析的仪器。核酸的定量是分光光度计使用频率最高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸，单链、双链DNA，以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波长260 nm。每种核酸的分子构成不一，因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸，事先要选择对应的系数。如：1OD 的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA，30μg/ml的Olig。测试后的吸光值经过上述系数的换算，从而得出相应的样品浓度。测试前，选择正确的程序，输入原液和稀释液的体积，尔后测试空白液和样品液。然而，实验并非一帆风顺。读数不稳定可能是实验者最头痛的问题。灵敏度越高的仪器，表现出的吸光值漂移越大。事实上，分光光度计的设计原理和工作原理，允许吸光值在一定范围内变化，即仪器有一定的准确度和精确度。如Eppendorf Biophotometer的准确度≤1.0%（1A）。这样多次测试的结果在均值1.0%左右之间变动，都是正常的。另外，还需考虑核酸本身物化性质和溶解核酸的缓冲液的pH值，离子浓度等：在测试时，离子浓度太高，也会导致读数漂移，因此建议使用。电泳法和紫外分光光度法检测DNA的浓度和纯度，哪种方法更好 两种方法各有优劣.电泳法更直观，如果你有DNA Maker，并且知道Maker的浓度，就可以使用一维条带分析软件如Quantity One分析样品中DNA的含量，而且可以很直观地了解目的DNA的纯度、大小等特性.但是，由于电泳中染色特异性很强，对DNA、RNA之外的小分子污染情况无法检测.紫外法可对样品中所有具紫外吸收特性的物质给出一个综合的结果.因此如果样品中有其他影响DNA后续操作的物质，样品吸光值就会有很大偏移.值得注意的是，紫外法仅可作为一个参考，吸光值是结果，而不是原因.吸光值符合要求并不能代表DNA纯度符合要求.一般紫外分析后还是要跑个电泳，两者结合就可靠多了.利用紫外分光光度计进行DNA含量测定的原理是（ ） D求助，求助，紫外线分光光度法测DNA含量问题 1．掌握单波长紫外/可见分光光度计的使用；2．学会利用解联立方程组的方法定量测定吸收曲线相互重叠的二元混合物。如何用紫外分光光度计测DNA浓度？ 实验原理DNA/RNA在260nm处有最大的吸收峰，蛋白质在280nm处有最大的吸收峰，盐和小分子则集中在230nm处。因此，可以用260nm波长进行分光测定DNA浓度，OD值为1相当于大约50μg/ml双链DNA。如用25px光径，用H2O稀释DNA/RNA样品n倍并以H2O为空白对照，根据此时读出的OD260值即可计算出样品稀释前的浓度：DNA（ug/ml）=50×OD260读数×稀释倍数。RNA（ug/ml）=40×OD260读数×稀释倍数。DNA/RNA纯品的OD260/OD280为1.8或2.0，故根据OD260/OD280的值可以估计DNA的纯度。若比值较高说明含有RNA，比值较低说明有残余蛋白质存在。OD230/OD260的比值应在0.4-0.5之间，若比值较高说明有残余的盐存在.本实验室机器显示是OD260\\OD230，则比值应在2-2.5之间，偏小则说明有残余盐剩余。实验步骤1.将制备的DNA悬浮溶解于TE缓冲液中[pH8.O，1Ommo1/L的Tris缓冲液，内含〈1mmol/LEDTA〉]或悬浮溶解在灭菌水中(依据DNA含量加水)。2.用可扫描的紫外分光光度计测定制备的DNA/RNA的紫外吸收曲线，测定OD260和OD280，并计算比值：OD260/OD280，纯DNA的此比值约为1.8～2.0。纯RNA的此比值约为大于2.0。3.根据：每毫升1微克的纯DNA的OD260值=0.020，计算所得DNA的纯度；每毫升1微克的纯RNA的OD260值=0。

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