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已知致病基因 多少是中国人发现的 双荧光素酶报道基因

2020-07-26知识6

不能转基因的植物如何研究基因的功能? 如题,有些植物的遗传转化体系并没有建立,瞬时转化的结果可信吗?还有什么其他的研究手段呢?癌症是否包含永生的秘密? 最近一直在看《众病之王》,看到最后思考越来越觉得癌症的不可破是因为TA比人类进化更完美?为什么双荧光素酶实验里面只要加了mimics荧光比值就降低 目的针对促肝细胞再生磷酸酶1(phosphatase of regenerating liver-1,PRL-1)3’端非翻译区(3-untranslatedregion,3’UTR)构建PRL-1荧光素酶报告基因载体及突变体,为研究miR-339-5p在结肠癌中调控其靶基因PRL-1提供有效的工具。方法 PCR扩增包含PRL-1的3’UTR的DNA片段,克隆至荧光素酶载体psiCHECK-2,构建psiCHECK-2/PRL-13’UTR载体;经双酶切及测序鉴定后,对psiCHECK-2/PRL-1 3’UTR重组质粒\"种子区\"的7个碱基进行定点突变,构建psiCHECK-2/PRL-1 3’UTR突变载体。结果克隆获得的psiCHECK-2/PRL-1 3’UTR载体中DNA片段大小及序列与GenBank报道的一致,且插入方向正确。种子区\"的7个碱基定点突变成功。结论成功构建了含PRL-1基因3’UTR区的荧光素酶报告基因载体及突变体,可用于后续功能研究。经常吃辣对身体有什么好处和坏处? 有人说吃辣能抑制食欲,也有人说能增强食欲;有人认为吃辣能防止癌症,也有人说吃辣易引起胃癌;有人说吃…报告基因的列举 (1)最常用的报告基因大多是编码抗生素抗性蛋白的基因,通过检查产物是否具有抗生素的抗性来确定基因的表达情况。(2)氯霉素乙酰基转移酶(CAT):该报告基因来源于大肠杆菌转位子9,是第1个用于检测细胞内转录活性的报告基因。氯霉素乙酰基转移酶可催化乙酰CoA的乙酰基转移到氯霉素3羟基,而使氯霉素解毒。CAT在哺乳细胞无内源性表达,性质稳定,半衰期较短,适于瞬时表达研究。可用同位素、荧光素和酶联免疫吸附测定(enzyme—linkedimmunosorbantassay,ELISA)检测其活性,也可进行蛋白质印迹(Westernblotting)和免疫组织化学分析。CAT与其他报告基因相比,线性范围较窄,灵敏性较低。(3)β半乳糖苷酶:β半乳糖苷酶由大肠杆菌lacZ基因编码,可催化半乳糖苷水解。最大优势是易于用免疫组织化学法观测其原位表达,是最常用的监测转染率的报道基因之一。以邻—硝基苯—β—D—半乳吡喃糖苷(ONPG)为底物可用标准的比色法检测酶活性,其检测动力学范围为6个数量级。氯酚红—β—D—半乳吡喃糖苷(CPRG)是另一个可用比色法检测酶活性的底物,其灵敏度比ONPG高近10倍。以MUG和荧光素二半乳糖苷(FDG)为底物则可用荧光法检测其活性。此法可检测单个细胞的酶活性,并可。已知致病基因 多少是中国人发现的 LRP5基因突变与FEVR发病关系及其对hREC转录组影响目的对家族性渗出性玻璃体视网膜病变(FEVR)的两个家系行临床表型分析和DNA测序,寻找致病基因的可能新突变位点。并进一步观察低密度脂蛋白受体相关蛋白-5基因(LRP5)表达抑制后人视网膜血管内皮细胞(hREC)转录组变化,初步探讨其影响血管生成的可能机制。方法1.收集两个FEVR家系的临床资料并提取DNA,行FEVR四个已知致病基因(LRP5、FZD4、NDP和TSPAN12)的外显子和相邻内含子区的Sanger测序,并构建相应LRP5突变质粒行荧光素酶活性实验,观察其对Norrin/β-catenin信号途径的影响,以判断突变的致病性。2.siRNA技术抑制hRECLRP5表达后,行转录组表达谱分析,筛选出差异显著的基因,并行GO和KEGGPathway分析。结果1.在两个FEVR家系中各发现了LRP5基因上的一个未报道过的杂合突变:p.A422T和p.L540P,这两个突变在各自的家系中与表型共分离,荧光素酶活性实验提示具有致病性。两个先证者还另外各有一个LRP5基因的杂合突变,先证者一的p.Q816P(来自于无疾病的母亲)和先证者二的新突变p.T852M(父母双方均无),荧光素酶活性实验提示p.Q816P可能无致病性,而p.T852M可能具有致病性。先证者的眼部表现均较患病的亲代重,可能与联合突变有关。。荧光素导入植物细胞中·有这样的植物吗·?就是长大后能发光的。 有哦【三大学生造出“聪明植物”】矮牵牛花通过发光与人交流 昨日下午,在新加坡理工学院宣传办公室的协助下,晨报记者对该校化学与生命科学分校的三年级女生李诗进行了。什么是基因二代测序? 第二代测序为2113高通量测序,采用5261微珠或高密度芯片边合成边测序,代4102表有454,solexa,solid,高通1653量,可一次获得数G数据,相对与第三代,都仍然需要扩增的方法放大信号,扩增后再检测。第二代测序技术的核心思想是边合成边测序(Sequencing by Synthesis),即通过捕捉新合成的末端的标记来确定DNA的序列,现有的技术平台主要包括Roche/454 FLX、Illumina/Solexa Genome Analyzer和Applied Biosystems SOLID system。第一代测序技术的主要特点是测序读长可达1000bp,准确性高达99.999%,但其测序成本高,通量低等方面的缺点,严重影响了其真正大规模的应用。因而第一代测序技术并不是最理想的测序方法。经过不断的技术开发和改进,以Roche公司的454技术、illumina公司的Solexa,Hiseq技术和ABI公司的Solid技术为标记的第二代测序技术诞生了。第二代测序技术大大降低了测序成本的同时,还大幅提高了测序速度,并且保持了高准确性,以前完成一个人类基因组的测序需要3年时间,而使用二代测序技术则仅仅需要1周,但在序列读长方面比起第一代测序技术则要短很多。拓展资料:1)测序文库的构建(Library Construction)首先准备基因组(虽然测序公司要求。为什么癌细胞会进行无氧氧化? 谢邀正常细胞的能量代谢特点为使用葡萄糖在线粒体内进行氧化磷酸化,这种代谢方式既经济,效率也高。肿瘤…在诺奖得主的实验室里工作是种怎样的体验? 近年来,每年十月由诺贝尔奖评选和颁授引起的学界讨论中,都少不了华人科学家的参与。2019年10月7日,发…

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