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为什么做细胞活性检测 CCK8 mtt法细胞毒性试验

2021-04-08知识2

MTT实验和CCK8的区别 CCK8,即2113Cell Counting Kit-8,与MTT法的主要区别如下:一、原理不同1、Cell Counting Kit-8:CCK-8 试剂盒5261利4102用了日本同仁化学研究所(Dojindo)开发的四唑盐WST-8(2-(2-甲氧1653基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)。2、MTT法:其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲臜,用酶联免疫检测仪在570nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。二、特点不同1、Cell Counting Kit-8:灵敏度高,数据可靠,重现性好;操作简便,省时省力;水溶性,不需要换液,尤其适合于悬浮细胞;无需放射性同位素和有机溶剂,对细胞毒性低;适合于高通量药物筛选。2、MTT法:特点是灵敏度高、经济。三、应用不同1、Cell Counting Kit-8:主要用途为药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验。2、MTT法:广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。参考资料来源:-。

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细胞毒性实验一般选择多大存活率的毒性浓度 测定细菌对2113细胞的毒性试验最好用ldh还是mtt法⒈5261选择适当的细胞接种浓度。一4102般情况下,96孔培养板的1653一内贴壁细胞长满时约有105个细胞。但由于不同细胞贴壁后面积差异很大,因此,在进行MTT试验前,要进行预实验检测其贴壁率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线,确定试验中每孔的接种细胞数和培养时间,以保证培养终止致细胞过满。这样,才能保证MTT结晶形成数量与细胞数呈的线性关系。否则细胞数太多敏感性降低,太少观察不到差异。⒉药物浓度的设定。一定要多看文献,参考别人的结果再定个比较大的范围先初筛。根据自己初筛的结果缩小浓度和时间范围再细筛。切记!否则,可能你用的时间和浓度根本不是药物的有效浓度和时间。⒊时间点的设定。在不同时间点的测定OD值,输入excel表,最后得到不同时间点的抑制率变化情况,画出变化的曲线,曲线什么时候变得平坦了(到了平台期)那个时间点应该就是最好的时间点(因为这个时候的细胞增殖抑制表现的最明显)。⒋培养时间。200ul的培养液对于10的4~5次方的增殖期细胞来说,很难维持68h,如果营养不够的话,细胞会由增殖期渐渐趋向G0期而趋于静止,影响结果,我们是在48h换液的。⒌MTT法只能。

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