高效液相做含测，保留时间差别大 是不是同一个样品不同时间做出来的保留时间差别较大？保留时间影响因素比较多，如果已经确定pH值影响不大，可以从以下几个方面进行考虑：1.流动相的比例，最好保证有机相的比例一致，保存及超声脱气的时候用封口膜封一下，减少有机相挥发，也不要放置太长时间2.柱温是否恒定，柱温在一定程度上会影响保留值，最好设为定值，不要设为不控制3.色谱柱有没有更换，不同厂家的同一类型色谱柱由于填充技术、制备工艺的不同，在同样色谱条件下对同一组分的保留情况会有所不同，即使是同一厂家的也会有这种情况4.液相系统是否更换，不同的色谱仪的管路长短不同，会使走样时柱压不同，柱压也会影响出峰时间和峰形，原理类似于加压过柱5.如果是梯度洗脱，要保证平衡时间足够长，否则也会引起保留值改变
用于反相高效液相色谱中测定死时间的物质有哪些？A苯磺酸钠 B萘 C酚 D笨 A.因为A是离子型的物质，按道理是没有保留的.所以苯磺酸钠出峰时间或者体积也可以，能代表死体积.
在柱长为18cm的高效液相色谱柱上分离组分A和B，其保留时间分别为16.40min和17.63min. 1、N1=16(tr/W1)2=16(16.40/1.10)2 约等于3556N2=16(tR2/W2)2=5.54(17.63/1.21)2 约等于3397N=(N1+N2)/2=34762、理论塔板高度（H）每单位柱长的方差.H=.实际应用时往往用柱长L和理论塔板数计算：.
