实时荧光定量pcr两步法与三步法的异同是什么？如何选择使用 我觉得还是看你用的机器和试剂盒吧，主要是那个聚合酶的要求.有的推荐两步法，有的推荐三步法.比如，ABI，roche都推荐两步法，tiangen的推荐三步法.我觉得，如果引物设计时的Tm值。
PCR的两步法和三步法有什么区别 1、步骤不同：两步法退2113火和延伸同时在60℃-65℃间5261进行，以4102减少一次升降温过程，而三步法则分两次1653完成。2、用时不同：两步法减少一次升降温过程，提高了反应速度，用时较短。而三步法则比两步法用时更长。3、适用条件不同：两步法中，PCR扩增区很短，即使Taq酶活性不是最佳也能在很短的时间内复制完成。三步法的PCR扩增区则较长，需要降低系统温度，引物与DNA模板结合，形成局部双链。扩展资料三步法的标准步骤与检测：1、DNA变性：（90℃-96℃）：双链DNA模板在热作用下，氢键断裂，形成单链DNA2、退火：（60℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部双链。3、延伸：（70℃-75℃）：在Taq酶（在72℃左右，活性最佳）的作用下，以dNTP为原料，从引物的3′端开始以从5′3′端的方向延伸，合成与模板互补的DNA链。4、检测：PCR反应扩增出了高的拷贝数，下一步检测就成了关键。荧光素（溴化乙锭，EB）染色凝胶电泳是最常用的检测手段。电泳法检测特异性是不太高的，因此引物两聚体等非特异性的杂交体很容易引起误判。但因为其简捷易行，成为了主流检测方法。近年来以荧光探针为代表的检测方法，有逐渐取代电泳法的趋势。参考资料来源：。
普通PCR中一步法、两步法、三步法的定义、区别、通途以及具体的设置条件 注意是普通PCR，不是荧光定量PCR，另外与RT-PCR有什么联系？注意是普通PCR，不是荧光定量PCR，另外。
