ZKX's LAB

MTT比色法测细胞活力的步骤 mtt调零孔的值

2021-04-06知识3

贴壁细胞mtt试验原理及方法步骤是什么? MTT原理\\x09MTT全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide,汉语化学名为 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐,商品名:噻唑蓝.是一种黄颜色的染料.\\x09MTT比色法,是一种检测细胞存活和生长的方法.其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能.二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒,用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量.在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比.该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等.它的特点是灵敏度高、经济.缺点:由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水,需被溶解后才能检测.这不仅使工作量增加,也会对实验结果的准确性产生影响,而且溶解甲的有机溶剂对实验者也有损害.MTT 溶液的配制方法 通常,此法中的MTT 浓度为5mg/ml.因此,可以称取MTT 0.5克,溶于100 ml的磷酸缓冲液(PBS)或无酚红的培养基中,用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌,放4℃ 避光保存即可.在配制和保存的过程中,容器最好用铝箔纸包住.实验。

在MTT实验中要设置调零孔(培养基、MTT、二甲基亚砜).而在加入MTT孵育4h之后需要将调零孔中的液体全部吸尽再加DMSO?还是不吸去调零孔中的液体直接加DMSO呢? 处理孔吸弃,但是调零孔不吸弃?两个都不吸弃?你要明确下面两点再考虑怎么处理:(1)培养液中的血清对DMSO溶解甲臜结晶是有干扰的;(2)调零孔的作用是给所有处理孔一个空白底值;另外,实在不想吸弃的话,可以使用SDS-HCl-异丁醇三联溶解液.

如何计算细胞倍增时间 无法解答 ⒈选择适当的细胞接种浓度。一般情况下,96孔培养板的一内贴壁细胞长满时约有105个细胞。但由于不同细胞贴壁后面积差异很大,因此,在进行mtt试验前,要进行预。

#mtt调零孔的值

随机阅读

qrcode
访问手机版