做MTT时,96孔培养板细胞浓度该是多少? 博凌科为我觉得细胞的浓度并不需要那么精确,关键是接种于每孔的细胞数就大致处于同一水平.比如我做MTT,起初用的细胞浓度为5000/ml,每孔100ul,培养3天观察,发现细胞数太少,各孔OD值反面难于比较.后来我换用 10000/ml,结果就很好.当然细胞数也不能太多,这其实取决于你细胞的生长速度,生长快的细胞,可接种浓度低点.这主要是使细胞增殖率不致受处理因素之外的其他因素影响,比 如接触抑制,营养竞争.总之,做MTT时细胞数应较低,目的就是为了排除其他因素的影响,以使每孔细胞生长情况尽可能地反映出处理因素的影响.细胞接种的浓度和你的实验目的、要求、细胞种类、处理因素的特殊要求都有关系.没有简单的,每孔接种多少的一个标准.当然,可以用楼上建议的浓度开 始摸索.同时,注意肿瘤细胞核正常细胞的生长数度也不一样,前者生长快,后者慢,细胞数的量也有讲究.到底多少合适,得根据你的实验具体要求来摸索.我做 b16转染时,因为脂质体要求细胞融合度为30%-50%,曾经没孔接种过300-500个细胞,效果非常好,
做流式的时候开始我是用MTT的细胞密度和铺板时间来决定加药时间让细胞长到多满的时候开始加药?
做MTT时细胞的接种密度对实验结果有什么影响呢? 你的解释是有道理的。处于对数生长期的细胞对药物是最敏感的,而对数生长期的细胞就是似满非满,长得太满的细胞肯定已过对数生长期,你要对接种的细胞浓度摸索一下,细胞。
细胞增殖实验(MTT法),MTT分析法以活细胞代谢物还原剂3-4,5-dimethylthiahiazo-z-y1-3,5-di-heytetrazoliumromide,MTT(噻唑蓝)为基础。MTT为黄色化合物,是一种接受氢。
MTT实验中的注意事项,在MTT实验中有许多细节是大家常常忽略的,以至于实验结果不如意,以下是一些好的细节归整,大家一起来学习吧!
MTT时,如何尽量保证各孔细胞数基本一致?混匀细胞所用容器是培养皿还是储液器? 博凌科为解答:MTT检测时各孔细胞数的均一可比是关键。首先要保证收集细胞的分散混匀,贴壁细胞要消化完全,悬浮集落细胞团块要吹散充分,最好显微镜下观察确定。其次 微量取液操作要规范、稳定,建议选用精密度较高的微量移液器和质地优良的Tip头。至于混匀细胞的场所是选择培养皿还是储液器,抑或其它容器,应该没有很 大的影响,只要方便操作且不影响细胞活力即可灵活选用。额外补充一句,MTT检测结果的影响因素除上面提及的方面外,每孔接种细胞的密度也是保证获取有意 义和正确结果的重要一环,具体的接种细胞密度要根据不同的实验目的和观察效应的差异进行调整、确定。