表达质粒构建中，做带有目的基因片段的pcr之前，需要对带有目的基因片段的质粒进行酶切吗？。 目的基因PCR的时候两头引物就要设计酶切位点了，要不怎么连的上呢.然后用内切酶消化质粒和目的基因，电泳纯化，再用T4连上.
省略构建重组质粒有何后果？会影响目的基因的复制，转录还是翻译？ 省略构建重组质粒，会影响目的基因的翻译。翻译是蛋白质生物合成（基因表达中的一部分，基因表达还包括转录）过程中的第二步（转录为第一步），翻译是根据遗传密码的中心法则，将成熟的信使RNA分子（由DNA通过转录而生成）中“碱基的排列顺序”（核苷酸序列）解码，并生成对应的特定氨基酸序列的过程。但也有许多转录生成的RNA，如转运RNA（tRNA）、核糖体RNA（rRNA）和小核RNA（snRNA）等并不被翻译为氨基酸序列。翻译过程需要的原料：mRNA、tRNA、20种氨基酸、能量、酶、核糖体。翻译的过程大致可分作三个阶段：起始、延长、终止。翻译主要在细胞质内的核糖体中进行，氨基酸分子在氨基酰-tRNA合成酶的催化作用下与特定的转运RNA结合并被带到核糖体上。生成的多肽链（即氨基酸链）需要通过正确折叠形成蛋白质，许多蛋白质在翻译结束后还需要在内质网上进行翻译后修饰才能具有真正的生物学活性。游离的碱基以mRNA为直接模板，tRNA为氨基酸运载体，核蛋白体为装配场所，共同协调完成蛋白质生物合成的过程。在翻译过程中mRNA上的每个三联体密码子对应tRNA上的一个三联体反密码子，且这个反密码子只对应一个氨基酸，但是一个氨基酸可有多组密码子（密码子具有简并性）来。
带有目的基因的质粒怎样导入受体细胞 你的受体细胞是什么？不同种类的细胞方法是不同的，转化效率也是不同的。所有转化法都需要先把受体细胞制作成感受态细胞。最好操作的就是大肠杆菌细胞。可选择的方法有：热激法，电穿孔法，化学转化法等。酵母：氯化锂转化法，电穿孔法，这两种方法一般需要把环形质粒线性化。真核细胞：原生质体融合，基因枪法，精子介导法，病毒载体介导法，显微注射法，花粉管介导法等等。
怎样将携带目的基因的质粒导入在体宿主细胞中呢 不同类型质粒，导入方法不同，请说明质粒是哪种。
在基因表达构建载体中什么切割质粒什么切割目的基因，为什么？ 质粒是一个闭合的DNA圆圈，你得先切开它，把它切成一条线；然后你再从一长串DNA上切下你要的目的片段，用连接酶像胶水一样，吧质粒的两端和目的片段的两端连接起来—又成一个圆圈了，但是这次这个DNA圆圈已经含有你要的片段了.由于载体质粒只有圆圈状才有活性，才有用，所以你必须这么做.
我已经有含有目的基因的T质粒了，怎样构建表达载体啊？谢谢 选择合适的表达质粒如pET系列，再选择合适的两个酶切位点，先从T载体上切下基因，与酶切好的表达质粒相连，就好。
关于基因工程的问题. 王老师给您解释这个问题：原因两点：1、重组质粒时候出现错误，有的是质粒和质粒重组，有的是目的基因和目的基因，导致最后检测重组质粒浓度不同；2、导入不成功，有的成功导入，有的则无，所以有的检测目的基因可以检测到，有的也不行.
基因工程种使用的载体除质粒外 还有什么目的基因的获取方法分别是 基因工程中运载体：质粒、噬菌体和动植物病毒。目的基因的获取方法：从基因文库中获取目的基因；利用PCR技术扩增目的基因；如果基因比较小，核苷酸序列又已知，也可以通过DNA合成仪用化学方法直接人工合成。
根据目的基因构建重组质粒的步骤 （1）用限制酶将质e5a48de588b662616964757a686964616f31333431356635粒切割开形成黏性末端，用DNA连接酶将目的基因与质粒连接起来．（2）质粒的实质是环状DNA，基本组成单位是脱氧核苷酸；由图中限制酶切割位置可知，目的基因插入的位置是氨苄青霉素抗性基因中．（3）步骤③是基因工程第三步：将目的基因导入大肠杆菌（受体细胞）．为了促进该过程，用Ca 2+处理大肠杆菌，使之成为感受态细胞．（4）培养基C是选择培养基，培养基中有四环素，专一筛选含四环素抗性基因的大肠杆菌，能在C中生长的大肠杆菌有两种，分别是含有抗四环素基因、同时抗四环素基因和含氨苄青霉素基因的大肠杆菌．（5）D培养基中大肠杆菌能抵抗四环素和含氨苄青霉素，而E中只抗一种四环素，所以在E中对应区域（D中没有菌落的部位），该处为转基因大肠杆菌，结果如图：故答案为：（1）限制酶 DNA连接酶（2）脱氧核苷酸 氨苄青霉素抗性（3）将重组质粒（目的基因）导入大肠杆 菌（受体细胞）Ca 2+（4）2（5）E 如下图所示（两点全圈出给分）．（1）限制酶 DNA连接酶（2）氨苄青霉素抗性（3）将重组质粒导入大肠杆菌（受体细胞）Ca 2+（4）含四环素抗性基因的大肠杆菌 2（5）E
