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分子生物学 dna聚合酶1的三种活性

2021-03-18知识7

原核生物DNA复制需要解旋酶吗?

什么是DNA聚合酶? DNA聚合酶的种类很多,它们在细胞中的DNA复制过程中起着重要的作用。DNA聚合酶有DNA聚合酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三类。基因工程中很多步骤都需要DNA聚合酶催化DNA体外合成反应,这些酶作用时大多都需要模板,合成产物的序列与模板互补。基因工程常用的DNA聚合酶有:①大肠杆菌聚合酶Ⅰ(全酶);②大肠杆菌聚合酶Ⅰ大片段(Klenow片段);③T4噬菌体DNA聚合酶;④T7噬菌体聚合酶及经修饰的T7噬菌体聚合酶(测序酶),⑤耐热DNA聚合酶(TaqDNA聚合酶);⑥末端转移酶(末端脱氧核苷酸转移酶,也属DNA聚合酶);⑦逆转录酶(依赖于RNA的DNA聚合酶)。DNA聚合酶Ⅰ是基因工程中最常用的工具酶。DNA聚合酶Ⅱ是一条120kD的肽链,催化5′3′方向合成DNA,也具有3′5′外切酶活性但没有5′3′外切酶活性。可能在当细胞DNA受到化学或物理损伤时,DNA聚合酶Ⅱ在修复过程中起特殊作用。DNA聚合酶Ⅲ全酶是一种大于250kD,由多种亚基组成的蛋白质,它是不对称的二聚体,两个亚基可分别同时催化前导链(leadingstrand)及后随链的合成。DNA聚合Ⅲ与DNA聚合酶Ⅰ相同,也具有3′5′外切酶活性。在DNA聚合作用中,核苷酸添加的错误率达1/1000。由于DNA聚合酶Ⅰ和DNA聚合酶Ⅲ全酶的3′5′外切酶活性,可以终止。

原核生物的三种DNA聚合酶有何共同特征和区别? 首先,原核生物DNA聚合酶分为Ⅰ2113,Ⅱ,Ⅲ。5261一、共同特征1、具有41025’→3’聚合酶活性,这就决定了DNA只能沿着5’→3’方向1653合成;2、需要引物,DNA聚合酶不能催化DNA新链从头合成,只能催化dNTP加入核苷酸链的3'-OH末端。因而复制之初需要一段RNA引物的3’一OH端为起点,合成5’→3’方向的新链。二、区别:1、DNA聚合酶I是单链多肽,可催化单链或双链DNA 的延长;2、DNA聚合酶II则与低分子脱氧核苷酸链的延长有关;3、DNA聚合酶III在细胞中存在的数目不多,是促进DNA链延长的主要酶.功能扩展资料:DNA聚合酶分类:1.大肠杆菌DNA聚合酶I大肠杆菌DNA聚合酶I是大肠杆菌polA基因编码由1000个氨基酸残基组成的单链多肽,具3种酶活性:5’→3’DNA聚合酶活性;5’→3’及3’→5’外切核酸酶活性。2、Klenow聚合酶(Klenow大片段)大肠杆菌DNA聚合酶I的3个结构功能域分别对应着3种不同酶活性。氨基端(1~326)具5'→3’外切酶活性;中间区域(326~542)具3'→5’外切酶活性;羧基端(543~928位)具5’→3’DNA聚合酶活性。枯草杆菌蛋白酶可将大肠杆菌DNA聚合酶I水解成大小2个片段:N端小片段包含1~326位残基,具5’→3’外切酶活性;而C端大片段包含。

聚合酶链式反应中DNA变性温度是多少度? 聚合酶链式反应(Polymerase 聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction),简称PCR,是一种分子生物学技术,用于放大特定的DNA片段,可看作生物体外的特殊DNA复制。。

原核生物和真核生物的DNA聚合酶有何不同? 总体而言:1.真核细胞有5种DNA聚合酶,分别为DNA聚合酶α(定位于胞核,参与复制引发具5-3外切酶活性),β(定位于核内,参与修复,具5-3外切酶活性),γ(定位于线粒体,参与线粒体复制具5-3和3-5外切活性),δ(定位核,参与复制,具有3-5和5-3外切活性),ε(定位于核,参与损伤修复,具有3-5和5-3外切活性).2.原核细胞有3种DNA聚合酶,都与DNA链的延长有关.DNA聚合酶I是单链多肽,可催化单链或双链DNA 的延长;DNA聚合酶II则与低分子脱氧核苷酸链的延长有关;DNA聚合酶III在细胞中存在的数目不多,是促进DNA链延长的主要酶.具体而言:(1)原核生物DNA聚合酶DNA聚合酶Ⅰ.在随从链合成时,先合成了许多冈崎片段,而后由于RNA引物的去除形成了空隙,此时DNA PolⅠ它催化聚合反应,延长了各个片段,从而填补了片段间的间隙,使以上片段得以靠近,为片段连接成长链创造了条件.所以DNA polⅠ的聚合作用主要是在填补随从链片段间空隙上发挥作用.DNA PolⅠ还具有3′5′外切酶活性可识别并去除错误的碱基.这种活性在DNA复制中起了校对功能.DNA PolⅠ的校对活性对DNA复制的准确性起着重要作用.DNA PolⅠ还具有5′3′外切酶活性.5′3′外切酶活性也有修正错误的功能,补充其3′5′外切酶。

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