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紫外分光光度计测定蛋白质含量 紫外分光光度计测抗体蛋白浓度

2021-03-09知识18

可以用紫外分光光度法对氨基酸,蛋白质进行定量分析吗 可以,而且实际上也是这么2113干的5261。不过用紫外分光光度法来分析有两4102种,一种是直接把蛋白质或氨1653基酸溶液在OD280下看峰,高级一点的如nanodrop这种机器就可以直接给出蛋白浓度,但这种方法极易受到抽提蛋白时去污剂的影响而出现严重偏差,所以如果是在缓冲液中的纯蛋白是可以这么检测定量的,比如买来的抗体就会提供OD280的数值来计算浓度。实际中常用的几种蛋白定量是将蛋白或氨基酸的溶液与某些化学物质反应(如bca法、Broadford法等)后在上紫外分光光度计测量OD值,用标准蛋白如BSA做一个标准曲线,再将未知蛋白测得的OD与标曲进行比较测得准确的浓度,在一定的浓度范围内,这些方法的准确性很高。

使用紫外可见分光光度计测蛋白质结构的原理是什么?如果出现负值是什么原因呢?(PS:已测过基线) 紫外可见分光光度计测定的是蛋白浓度,X射线晶体衍射测的才是蛋白质结构.紫外分光光度计测蛋白浓度原理:组成蛋白质的氨基酸里,有三种氨基酸:苯丙氨酸,酪氨酸,色氨酸具有苯环的共轭结构,它们对特定波长的紫外线具有吸收光谱,也就是说:它们对紫外线是有颜色的.每种蛋白质根据苯环的数量和分布都有一定的吸收强度,总的吸收值和分子的浓度呈正比.根据蛋白质溶液对280nm紫外线的吸收强度,可以测定出蛋白质的浓度.X射线晶体衍射测蛋白结构原理:蛋白质的肽链不是杂乱无章的,按照一定的规则盘曲成了特定的形状(蛋白质高级结构),每个碳-碳键都有它特定的构象,这种特定的结构是蛋白质作为分子机器的基础.结晶的蛋白质中,分子排成了空间重复的有序的结构,而原子之间的间隙与X射线的波长类似,构成了X射线的衍射光栅.当用X射线照射这种重复性的天然光栅时,通过波的衍射形成了有规则的干涉条纹,分析这些条纹就可以解析出蛋白质分子中每个原子的位置.

紫外光吸收法测定蛋白质浓度时,为什么要同时测定280nm及260nm的吸光度 紫外吸收检测2113DNA浓度与纯度2007年11月13日5261 星期二 11:40目的:了解紫外吸收检测DNA浓度与纯4102度的原理,掌握测定方法.原理:1653 核酸的最大吸收波长为260nm,蛋白质为280nm,在波长260nm时,1OD值相当于双链DNA浓度为50μg/ml,单链 寡核苷酸的含量为30μg/ml,可以据此来计算核酸样品的浓度,还可通过测定在260nm和280nm的OD值的比值(OD260/OD280),估计核酸的纯度.纯净DNA的比值为1.8,RNA为2.0.若比值高于1.8说明DNA样品中的RNA尚未除 尽,若样品中含有酚和蛋白质将导致比值降低.270nm存在高吸收表明有酚的干扰.紫外分光光度法只能用于测定浓度 大于0.25μg/ml的核酸溶液,对浓度更小的样品,可采用荧光分光光度法.试剂与仪器:提取的质粒DNA,紫外分光光度仪.操作步骤:1)分光光度计先用水在260nm和280nm两个波长下校零.2)取质粒DNA样品2μl,用水稀释100倍,转入分光光度计的石英比色杯中.3)在260nm和280nm分别读出样品光密度值.如果样品浓度单位为μg/μl,则样品DNA浓度为OD 值的10倍,即如 OD260=0.1,则样品浓度即为1μg/μl.4)若OD260/OD280大于1.8,说明仍有RNA,可以考虑用RNA酶处理样品,若小于1.8,说 明样品中含有蛋白质或酚,应再用酚/氯仿抽提,以乙醇沉淀纯化。

紫外分光光度计测定蛋白质含量,紫外分光光度计在调校好对应的波长后,可以测定待测定定的蛋白质的浓度等等。

去文库,查看完整内容>;内容来自用户:空白已过时go紫外分32313133353236313431303231363533e58685e5aeb931333433646431光光度法测定蛋白质含量一、实验目的?1、学习紫外分光光度法测定蛋白质含量的原理;?2、掌握紫外分光光度法测定蛋白质含量的实验技术;?3、掌握TU-1901紫外-可见分光光度计的使用方法并了解此仪器的主要构造。二、实验原理紫外-可见吸收光谱法又称紫外-可见分光光度法,它是研究分子吸收190nm~750nm波长范围内的吸收光谱,是以溶液中物质分子对光的选择性吸收为基础而建立起来的一类分析方法。紫外-可见吸收光谱的产生是由于分子的外层价电子跃迁的结果,其吸收光谱为分子光谱,是带光谱。进行定性:利用紫外-可见吸收光谱法进行定性分析一般采用光谱比较法。即将未知纯化合物的吸收光谱特征,如吸收峰的数目、位置、相对强度以及吸收峰的形状与已知纯化合物的吸收光谱进行比较。定量分析:紫外-可见吸收光谱法进行定量分析的依据是朗伯-比尔定律:A=lgI0/I=εbc,当入射光波长λ及光程b一定时,在一定浓度范围内,有色物质的吸光度A与该物质的浓度c成正比,即物质在一定波长处的吸光度与它的浓度成线形关系。因此,通过测定溶液对一定波长入射光的。

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如何将紫外分光光度计测量结果转换成蛋白质浓度?

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如何将紫外分光光度计测量结果转换成蛋白质浓度? 利用分光光度计测定蛋白浓度需要先进行蛋白浓度标准曲线绘制.就是测量一系列已知浓度蛋白的吸光值,然后以蛋白浓度为横坐标,吸光值为纵坐标绘制一条直线,然后将你所测样品的吸光值比对该直线所得横坐标即为样品的蛋白质浓度

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