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细胞培养实验中的操作要求 培养基促生长试验方法 药典

2021-03-09知识5

2015版药典检测微生物用什么培养基 您好、对照培养基只能在中检所购买,自己是没法生产对照培养基的。对照试验可以参照相关标准。北京陆桥技术股份有限公司

中国药典无菌检查法的方法验证试验 当建立产品的无菌检查法时,应进行方法的验证,以证明所采用的方法适合于该产品的无菌检查。若该产品的组分或原检验条件发生改变时,检查方法应重新验证。验证时,按“供试品的无菌检查”的规定及下列要求进行操作。对每一试验菌应逐一进行验证。取每种培养基规定接种的供试品总量按薄膜过滤法过滤,冲洗,在最后一次的冲洗液中加入小于100 cfu的试验菌,过滤。取出滤膜接种至硫乙醇酸盐流体培养基或改良马丁培养基中,或将培养基加至滤筒内。另取一装有同体积培养基的容器,加入等量试验菌,作为对照。置规定温度培养3~5天,各试验菌同法操作。(注:《中国药典》2010版三部附录ⅩⅡA无菌检查法为“细菌置30℃~35℃、真菌置20~25℃培养3~5天,逐日观察各滤筒内实验菌的生长情况。取符合直接接种法培养基用量要求的硫乙醇酸盐流体培养基8管,分别接入小于100 cfu的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌各2管,取符合直接接种法培养基用量要求的改良马丁培养基4管,分别接入小于100 cfu的白色念珠菌、黑曲霉各2管。其中1管接入每支培养基规定量的供试品量,另1管作为对照,按置规定的温度培养3~5天。(注:《中国药典》2010版三部附录ⅩⅡA无菌。

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中国药典无菌检查法的供试品处理及接种培养基 除另有规定外,按下列方法进行。薄膜过滤法应优先采用封闭式薄膜过滤器,也可使用一般薄膜过滤器。无菌检查用的滤膜孔径应不大于0.45μm。直径约为50mm。根据供试品及其溶剂的特性选择滤膜材质。抗生素供试品应选择低吸附的滤器及滤膜。滤器及滤膜使用前应采用适宜的方法灭菌。使用时,应保证滤膜在过滤前后的完整性。水溶性供试液过滤前先将少量的冲洗液过滤以润湿滤膜。油类供试品,其滤膜和过滤器在使用前应充分干燥。为发挥滤膜的最大过滤效率,应注意保持供试品溶液及冲洗液覆盖整个滤膜表面。供试液经薄膜过滤后,若需要用冲洗液冲洗滤膜,每张滤膜每次冲洗量一般为100ml,总冲洗量不得超过1000ml,以避免滤膜上的微生物受损伤。水溶液供试品取规定量,直接过滤,或混合至含适量稀释液的无菌容器内,混匀,立即过滤。如供试品具有抑菌作用或含防腐剂,须用冲洗液冲洗滤膜,冲洗次数一般不少于3次,所用的冲洗量、冲洗方法同方法验证试验。冲洗后,如用封闭式薄膜过滤器,分别将100ml硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基加入相应的滤筒内。如采用一般薄膜过滤器,取出滤膜,将其分成3等份,分别置于含50ml硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基容器中,其中一。

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细胞培养实验中的操作要求,细胞培养过程中很多时候细胞的死亡是因为无菌操作的不到位导致的,但有时候无菌操作到位,细胞依旧死亡,这个时候就要考虑实验过程中的操作是否。

中国药典微生物限度检查法的控制菌检查 控制菌检查用的培养基应进行培养基的适用性检查,成品培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应检查。菌种对试验菌种的要求同计数培养基的适用性检查。大肠埃希菌(Escherichia coli)[CMCC(B)44l02]金黄色葡萄球菌(StapHylococcus aureus)[CMCC(B)26003]乙型副伤寒沙门菌(Salmonella paratypHi B)〔CMCC(B)50094〕铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)〔CMCC(B)10104〕生孢梭菌(Clostridium sporogenes)[CMCC(B)6494l]白色念珠菌(Candida albicans)〔CMCC(F)98001〕菌液制备接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、乙型副伤寒沙门菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中或营养琼脂培养基上,生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中,培养18~24小时;接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中或改良马丁琼脂培养基上,培养24~48小时。用0.9%无菌氯化钠溶液制成每lml含菌数为10~100cfu的菌悬液。菌悬液在室温下放置应在2小时内使用.若保存在2~8 ℃可在24小时内使用。适用性检查控制菌检查用培养基的适用性检查项目包括促生长能力、抑制能力及指示能力的检查。各培养基的检测项目及所用菌株见表2。表2 控制菌检查用培养基。

培养基做了灵敏度实验,能不能不做促生长试验了呢?

2015版中国药典微生物限度检查培养基适用性对照培养基怎么做 您好、对照培养基只能在中检所购买,自己是没法生产对照培养基的。对照试验可以参照相关标准。。

如何用TTC法测定细胞活力(具体步骤)? 1.浸泡 将待测种子在 30 35 ℃温水中浸种(大麦、小麦 6 小时,玉米 5 小时左右),以增强种胚的呼吸作用.2.显色 取吸胀的种子 200 粒,用刀片沿种子胚的中心线纵切为两半,将其中的一半置于 2 只培养皿中,每皿 100 个半粒,加入适量的 0.5%TTC 溶液,以覆盖种子为度.然后置于 30 ℃恒温箱中 1 h.观察结果,凡胚被染为红色的是活种子.将另一半在沸水中煮 5 min 杀死胚,作同样染色处理,作为对照观察.3.计算活种子的百分率

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