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实时定量看家基因的筛选 内参β-actin是什么意思?

2021-03-08知识5

半定量分析是什么意思?定性分析是能区分出是个什么东西。举个例子来说,你能辨认出这是苹果,但你不能确定是几个苹果。定量分析是在定性的基础上给出清:-定量分析

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如何评价一人之下中的八奇技?

β-Actin抗体是Western Blot很好的内参指数,是啥意思? 描述有问题。抗体检2113测的是抗原,所以5261你检测的是β-Actin做western很重要的4102一点就是要有一个参照,比如1653你要检测淋巴细胞某个蛋白的表达,甚至它的变化(比如对某个细胞因子的反应),这时β-Actin起到几个作用:1、如果目的蛋白检测不到而且β-Actin也检测不到,那么你的体系有问题,因为β-Actin是看家基因编码的,理论上是100%检测到的;2、如果目的蛋白检测不到但β-Actin检测到,说明目的蛋白没有表达或者量很低;3、作为看家基因,β-Actin被认为表达水平不受其它因素影响,是比较稳定的。当细胞接受细胞因子刺激后,目的蛋白的量在参考β-Actin的量后可能发生变化,这时β-Actin还起到一个半定量的作用。所谓内参就是内部参照的意思。Western的抗体通常分为一抗和二抗,一抗结合目的蛋白,这是Western变化最多的地方;二抗则比较通用,商品很成熟,二抗带有荧光或者酶标记,它是结合一抗的,但却是得到结果的重要试剂。这种方法属于间接标记。Western很少有直接标记的方法。

做相对定量PCR 时,目的基因CT 值比内参基因CT 值低,是什么原因,别人 有多种原因。如果根据经验目的基因的表达确实应该低于内参基因的话,常见的问题是模板异常,如严重的DNA污染等。但也不排除其他原因,如引物特异性等。

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