紫外分光光度法测定蛋白质含量的方法有何优缺点受哪些因素的影响和限制 紫外分光光度法检测蛋白验证

蛋白质检测方法-紫外分光光度法的准确性高吗？高中生物中有鉴定方法？哈哈哈？紫外分光光度法测定蛋白质含量的方法有何优缺点受哪些因素的影响和限制 紫2113外分光光度法测定蛋白质含量的方法有5261何优缺点？受4102哪些因素的影响和限1653制？答：优点是：方法简单、灵敏、快速、高选择性，且稳定性好，不消耗样品，低浓度的盐类不干扰测定。缺点是：仪器昂贵，而且不同的蛋白质的紫外吸收是不相同的，测定结果存在着一定的误差，受光源、溶液的PH值、比色皿材质、缓冲介质溶液等因素的影响和限制。紫外分光光度法测量蛋白质的含量的原理？ 1紫外吸收光谱是基于物质的生色团和助色团的特性对紫外光谱的吸收，可用于物质的鉴定和结构分析.2参与蛋白质组成的20种氨基酸中色氨酸(Trp)、酪氨酸(Tyr)和苯丙氨酸(Phe)的R基团中含有苯环共轭双键系统，在紫外光区（220-300nm）显示特征的吸收谱带，最大光吸收（？max）分别为279、278、和259nm。由于大多数蛋白质都含有这些氨基酸残基，因此用紫外分光光度法可测定蛋白质含量。因此可以用标准曲线法在280nm测样品吸光度，求得蛋白含量。求 怎样用紫外分光光度法测蛋白质含量 1、280nm的光吸收法用标准曲线法进行测定。标准蛋白质溶液配制的浓度为1.0 mg/mL。常用的标准蛋白质为牛血清清蛋白(BSA)。2、280 nm和260 nm的吸收差法核酸对紫外光有很强的吸收，在280 nm处的吸收比蛋白质强10倍(每克)，但核酸在260 nm处的吸收更强，其吸收高峰在260 nm附近。核酸260 nm处的消光系数是280 nm处的2倍；而蛋白质则相反，其280 nm的紫外吸收值大于260 nm的吸收值。3、215 nm与225 nm的吸收差法蛋白质的稀溶液由于含量低而不能使用280 nm的光吸收测定时，可用215nm与225 nm吸收值之差，通过标准曲线法来测定蛋白质稀溶液的浓度。4、肽键测定法蛋白质溶液在238 nm处的光吸收的强弱，与肽键的多少成正比。因此可以用标准蛋白质溶液配制一系列50～500 mg/mL已知浓度的5.0 mL蛋白质溶液，测定238 nm的光吸收值A238，以A238为纵坐标，蛋白质含量为横坐标，绘制出标准曲线。未知样品的浓度即可由标准曲线求得。扩展资料：紫外分光光度法原理光谱法（spectrometry）是基于物质与电磁辐射作用时，测量由物质内部发生量子化的能级之间的跃迁而产生的发射、吸收或散射辐射的波长和强度进行分析的方法。光谱法可分为发射光谱法、吸收光谱法、散射光谱法；或。紫外分光光度法测溶液浓度？ 1、280nm的光吸收法用标准曲线法进行测定。标准蛋白质溶液配制的浓度为1.0 mg/mL。常用的标准蛋白质为牛血清清蛋白(BSA)。2、280 nm和260 nm的吸收差法核酸对紫外光有很强的吸收，在280 nm处的吸收比蛋白质强10倍(每克)，但核酸在260 nm处的吸收更强，其吸收高峰在260 nm附近。核酸260 nm处的消光系数是280 nm处的2倍；而蛋白质则相反，其280 nm的紫外吸收值大于260 nm的吸收值。3、215 nm与225 nm的吸收差法蛋白质的稀溶液由于含量低而不能使用280 nm的光吸收测定时，可用215nm与225 nm吸收值之差，通过标准曲线法来测定蛋白质稀溶液的浓度。4、肽键测定法蛋白质溶液在238 nm处的光吸收的强弱，与肽键的多少成正比。因此可以用标准蛋白质溶液配制一系列50～500 mg/mL已知浓度的5.0 mL蛋白质溶液，测定238 nm的光吸收值A238，以A238为纵坐标，蛋白质含量为横坐标，绘制出标准曲线。未知样品的浓度即可由标准曲线求得。扩展资料：紫外分光光度法原理光谱法（spectrometry）是基于物质与电磁辐射作用时，测量由物质内部发生量子化的能级之间的跃迁而产生的发射、吸收或散射辐射的波长和强度进行分析的方法。光谱法可分为发射光谱法、吸收光谱法、散射光谱法；或分为原子光谱法和。紫外分光光度法的原理是什么？？ 紫外-可见分光光度2113法：是根据物质分子对波长5261为200-760nm这一范围的电磁波的吸4102收特性1653所建立起来的一种定性、定量和结构分析方法。操作简单、准确度高、重现性好。波长长（频率小）的光线能量小，波长短（频率大）的光线能量大。分光光度测量是关于物质分子对不同波长和特定波长处的辐射吸收程度的测量。我们测蛋白质溶解度用的是紫外分光光度法，可以不用标准蛋白么 是测溶液蛋白质浓度吧。必须要有标准曲线。你得知道你的蛋白的epsilon值，就是extinction coefficient。如果你有该蛋白的标准曲线，你就可以直接根据紫外读数，对照标准曲线对应出蛋白浓度，如果没有的话，只能读出样品的紫外吸光值，对照其他已知extinction coefficient的蛋白的标准曲线，然后查你的蛋白的extinction coefficient，然后除以这个coefficient得出浓度。我们现在通常用Nano Drop测蛋白浓度，程序里有一个自带的extinction coefficient为1的蛋白的标准曲线，所以只要把测得的浓度除以你的蛋白实际的extinction coefficient就可以了，很方便。我们测蛋白质溶解度用的是紫外分光光度法，可以不用标准蛋白么 是测溶液蛋白质浓度吧.必须要有标准曲线.你得知道你的蛋白的epsilon值，就是extinction coefficient.如果你有该蛋白的标准曲线，你就可以直接根据紫外读数，对照标准曲线对应出蛋白浓度，如果没有的话，只能读出样品的紫外吸光值，对照其他已知extinction coefficient的蛋白的标准曲线，然后查你的蛋白的extinction coefficient，然后除以这个coefficient得出浓度.我们现在通常用Nano Drop测蛋白浓度，程序里有一个自带的extinction coefficient为1的蛋白的标准曲线，所以只要把测得的浓度除以你的蛋白实际的extinction coefficient就可以了，很方便.紫外分光光度法的验证内容和要求 验证内容？可否理解为能做什么？一般来说，用紫外分光光度计来检测，都是测的微量或痕量离子的含量（一般是浓度），一般其测定需要借助显色剂或退色剂.测定时首先需要配标准溶液，然后测待测样品，得到的吸光度值在标准曲线上查找得到对用的浓度.要求？检测的要求还是被测物的要求？监测的时候，一般需要先校正光度计，然后用空白走基线，然后才能开始测定.测定的时候需要有稳定的电压，所以很多时候需要稳压器.被测物：一般要求被测物中离子的含量不要太高，一般到g/L就足够大了，据我所知，常被监测的浓度范围是ppm或ppb级的.被测物最好不要有太多杂质，不然会干扰测定的，所以测实际样品是一般需要预处理；最好不要有颜色，这样必定会干扰测定；一定不能有固体。

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