用紫外分光光度法测定核酸有什么缺点 紫外分光光度法测rna

用紫外分光光度法测定核酸有什么缺点 核酸、核苷酸及其衍生物的分子结构中的嘌呤、嘧啶碱基具有共轭双健系统（－C＝C一C＝C 一），能够强烈吸收250~280nm 波长的紫外光.核酸（DNA，RNA）的最大紫外吸收值在260nm 处.遵照Lambert-Beer 定律，可以从紫外光吸收值的变化来测定核酸物质的含量.在不同pH 溶液中嘌呤、嘧啶碱基互变异构的情况不同，紫外吸收光也随之表现出明显的差异，它们的摩尔消光系数也随之不同.所以，在测定核酸物质时均应在固定的pH溶液中进行.核酸的摩尔消光系数（或吸收系数），通常以ε（ρ）来表示，即每升含有一摩尔核酸磷的溶液在260nm 波长处的消光值（即光密度，或称为光吸收）.核酸的摩尔消光系数不是一个常数，而是依赖于材料的前处理、溶液的pH 和离子强度发生变化.它们的经典数值（pH=7.0）如下：DNA 的ε（ρ）=6 000 8 000RNA 的ε（ρ）=7 000 10 000小牛胸腺DNA 钠盐溶液（pH=7.0）的ε（ρ）=6 600，DNA 的含磷量为9.2%，含1μg/mL DNA 钠盐的溶液光密度为0.020.RNA 溶液（pH=7.0）的ε（ρ）=7 700~7 800，RNA 的含磷量为9.5%，含1μg/mL RNA 溶液的光密度为0.022~0.024.采用紫外分光光度法测定核酸含量时，通常规定：在260nm 波长下，浓度为1μg/mL 的 DNA 溶液其光密度为0.020，。紫外可见分光光度计法测核酸含量有何优缺点 方便，灵敏，除了知道含量，还知道组成成分，比如od260/od280低了，就说明蛋白等杂志多了。但是，不知道质量，比如真核rna：跑胶的话有三条带，说明你的rna抽的不错，但是用分光光度计虽能测出rna含量高，但是我们不知道是不是被降解了；或者dna是不是断裂了~如何根据紫外线分光光度法检测的RNAA260和A280结果分析RNA浓度与纯度？ 如何根据紫外线分光光度法检测的RNAA260和A280结果分析RNA浓度与纯度，足差不多的。用分光光度计测DNA、RNA的浓度 最低0.27元开通文库会员，查看完整内容>；原发布者：ryp923用分光光度计测定质粒DNA的浓度一、目的熟练掌握分光光度法检测DNA纯度和浓度的方法。二、原理DNA或RNA链上碱基的苯环结构在紫光区具有较强吸收，其吸收峰在260nm处。波长为260nm时，DNA或RNA的光密度OD260不仅与总含量有关，也随构型而有差异。对标准样品来说，浓度为1μg/ml时，DNA钠盐的OD260＝0.02当OD260＝1时，dsDNA浓度约为50μg/mlssDNA浓度约为37μg/mlRNA浓度约为40μg/ml寡核苷酸浓度约为30μg/ml（youyu底物不同有差异）当DNA样品中含有蛋白质、酚或其他小分子污染物时，会影响DNA吸光度的准确测定。一般情况下同时检测同一样品的OD260、OD280和OD230，计算其比值来衡量样品的纯度。经验值：纯DNA：OD260/OD280≈1.8(＞1.9，表明有RNA污染；6，表明有蛋白质、酚等污染）纯RNA：1.7（时表明有蛋白质或酚污染；2.0时表明可能有异硫氰酸残存）若样品不纯，则比值发生变化，此时无法用分光光度法对核酸进行定量，可使用方案二的方法或其他方法进行估算。三、材料、试剂及器具1、材料提取的PUC19样品、PUC19标准样品2、试剂灭菌重蒸水，TE缓冲液四、操作步骤1、UV-240紫外分光光度计开机预热10min.2、用重蒸水。

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