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DNA胶插梳子 DNA跑胶时提到的Marker是干什么用的

2020-10-16知识40

用PAGE胶跑DNA用PAGE胶跑DNA的话,那和western blot中跑蛋白的胶有何不同?例如胶的配法、浓度、上样量、用多少电压等,而且marker没有颜色,怎么知道跑到了哪里?谢谢! 首先原理差不多,具体细节差异还是有的。跑DNA的话,可以参见 人家做AFLP的protocol,当然也要看你想分离的片断大小咯。两者都要用到丙烯酰胺、甲叉丙烯酰胺、TEMED、APS(10%)但是跑DNA一般用 TBE(Tris、硼酸、EDTA),还含尿素 用于western的蛋白胶多用 Tris-HCl,SDS buffer。蛋白较一般有分离胶和浓缩胶。浓度看分离的东西;上样量的话其实没法比较,染色的方法不一样,DNA银染的话少上点,具体多少我也记不清了,自己查一下吧;如果说是上样体积,看你的梳子大小咯 电压:AFLP要求DNA要预电泳,冲洗掉尿素后再插梳子,60W 2h;当二甲苯青跑到底部约1/3处终止电泳。DNA的loading buffer含染料 溴酚蓝、二甲苯青等来指示跑到哪里呢。

DNA胶插梳子 DNA跑胶时提到的Marker是干什么用的

提取DNA后为什么要跑胶? 通过跑胶看看提取的DNA的长度,有没有很多断裂(跑胶后表现为拖尾严重),以及浓度(条带亮不亮),有没有RNA污染(表现为100bp一下还有一团一团的条带)

DNA胶插梳子 DNA跑胶时提到的Marker是干什么用的

PCR 后酶切,凝胶电泳,EB染色,做的胶是一块胶上左右两个半块,每次右边半块不显色或者特别浅就是我做的胶是一块胶上最左边以及胶的中间各插了一个梳子,酶切后同时点样同时跑胶,为什么每次都是左边的那块显色很清楚,右边的那块就不清楚,甚至都没法判断条带是否分开了,有人说可能是因为EB跟DNA跑的方向相反,左边的那块上面跑完后EB更多一些,让我们跑完后泡EB溶液,还是没用.因为要加快速度,所以一定是要两

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DNA跑胶具体步骤? 制胶、设置电泳系统(缓冲液、电源、电泳槽等)、DNA样品准备(DNA及DNA Marker+上样缓冲液)、加样、电泳、染色、UV检测分析等.

DNA跑胶时提到的Marker是干什么用的 Maker是一2113系列大小已知的DNA片段,用5261来在跑胶完成后标示样品4102DNA的片段大小。另外,Maker还可以用来排除电1653泳的技术问题,若跑完后,连Maker都没有显示,则证明电泳过程出现了技术问题。若Maker显示正常,样品DNA没有,则证明样品DNA存在问题。

基因组提取完成后进行跑胶 胶的梳子拔的可能有点早 跑完之后就成这 早不 早没关系,一是胶做的怎么样,GV染色是否均匀,别和我说你还在用EB,还有就是你的DNA质量

#dna#蛋白电泳#dna提取#丙烯酰胺#电泳

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