如何证明所提蛋白为核蛋白或细胞浆蛋白免疫组化中,所染色的蛋白的位置与该蛋白的特性有关系。在现有所研究的蛋白中,不少蛋白存在核转位的情况,也就是说当细胞培养的环境或者刺激的因素不同,该蛋白会出现从胞浆到细胞核的表达位置的改变。有时候表达不变仅仅是从胞浆转位到细胞核,有时候还伴有表达的上调,比如nf-kb。ripa裂解液对核蛋白的提取好点。加到细胞培养皿里面,摇15分钟,然后刮下来吸出来,是做western的话加Loading buffer 再95°煮10分钟。裂解液裂解是一种比较温和的红细胞去除方法,主要用于经酶消化分散的组织细胞的分离纯化,淋巴细胞的分离纯化以及组织细胞蛋白与核酸提取等实验中红细胞的去除。经红细胞裂解液裂解得到的组织细胞中不含红细胞,可进一步用于原代培养、细胞融合、流式细胞分析、核酸与蛋白的分离和提取等。
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几种蛋白质的分离及分离原理?试比较膜蛋白,核蛋白,糖蛋白,和脂蛋白的异同点,如欲提取分离这四类蛋白,分离方法?原因及原理?
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