紫外-可见分光光度法纯化水水的吸收度 急求紫外分光光度法的详细操作步骤

求 怎样用紫外分光光度法测蛋白质含量 1、280nm的光吸收法用标准曲线法进行测定。标准蛋白质溶液配制的浓度为1.0 mg/mL。常用的标准蛋白质为牛血清清蛋白(BSA)。2、280 nm和260 nm的吸收差法核酸对紫外光有很强的吸收，在280 nm处的吸收比蛋白质强10倍(每克)，但核酸在260 nm处的吸收更强，其吸收高峰在260 nm附近。核酸260 nm处的消光系数是280 nm处的2倍；而蛋白质则相反，其280 nm的紫外吸收值大于260 nm的吸收值。3、215 nm与225 nm的吸收差法蛋白质的稀溶液由于含量低而不能使用280 nm的光吸收测定时，可用215nm与225 nm吸收值之差，通过标准曲线法来测定蛋白质稀溶液的浓度。4、肽键测定法蛋白质溶液在238 nm处的光吸收的强弱，与肽键的多少成正比。因此可以用标准蛋白质溶液配制一系列50～500 mg/mL已知浓度的5.0 mL蛋白质溶液，测定238 nm的光吸收值A238，以A238为纵坐标，蛋白质含量为横坐标，绘制出标准曲线。未知样品的浓度即可由标准曲线求得。扩展资料：紫外分光光度法原理光谱法（spectrometry）是基于物质与电磁辐射作用时，测量由物质内部发生量子化的能级之间的跃迁而产生的发射、吸收或散射辐射的波长和强度进行分析的方法。光谱法可分为发射光谱法、吸收光谱法、散射光谱法；或。急求紫外分光光度法的详细操作步骤 一、原理可见光、紫外线照射某些物质，主要是由于物质分子中价电子能级跃迁对辐射的吸收，而产生化合物的可见紫外吸收光谱。基于物质对光的选择性吸收的特性而建立分光光度法或称吸收光谱法的分析方法。它是以朗伯─比耳定律为基础。1朗伯—比耳定律 A=lg—-=ECLT式中 A为吸收度；T为透光率；E为吸收系数，采用的表示方法是（E1％1cm），其物理意义为当溶液浓度为1%（g/ml），液层厚度为1cm时的吸收度数值；C为100ml溶液中所含被测物质的重量（按干燥品或无水物计算），g；L为液层厚度，cm。二、使用范围凡具有芳香环或共轭双键结构的有机化合物，根据在特定吸收波长处所测得的吸收度，可用于药品的鉴别、纯度检查及含量测定。三、仪器可见-紫外分光光度计。其应用波长范围为200～400nm的紫外光区、400～850nm的可见光区。主要由辐射源（光源）、色散系统、检测系统、吸收池、数据处理机、自动记录器及显示器等部件组成。本仪器是根据相对测量的原理工作的，即先选定某一溶剂（或空气、试样）作为标准（空白或称参比）溶液，并认为它的透光率为100％（或吸收度为0），而被测的试样透光率（或吸收度）是相对于标准溶液而言，实际上就是由出射狭缝射出的单色光，。解释紫外可见分光光度法测量时为什么要将吸光度控制在一定范围之内 原理讲相同点：都基于A=KC进行浓度测2113量AAS与UV-Vis定浓度范围内其吸光度与浓度比完浓度测测量同点：虽都基于浓度 与光吸收间5261关系测量于AAS基态原吸收空阴极灯光源4102能量所需能量较高；UV-Vis溶液态物质吸收氘灯或钨灯光源能量所需能量较于1653AAS说A=KN0LN0指基态原数目L指火焰度；某种程度说N0比于溶液浓度；于UV-vis说A=KCL我称光吸收定律K称吸光系数采用ε称摩尔吸光系数仪器结构讲相同点都具光源、吸收池、光系统、内检测系统构同点：AAS光源空阴极灯、UV-Vis氘灯及钨灯AAS光系统吸容收池UV-Vis吸收池前AAS光系统主要部件光栅UV-Vis棱镜AAS吸收池需要溶液经系列程原化UV-Vis比色皿原子吸收分光光度法和紫外可见分光光度法有何异同 原子吸收分光光度计与紫外可见分光光度计的区别1、原理：原子吸收观察的是构成物质的元素（原子）中的电子在原子轨道中的跃迁，属于原子吸收。紫外可见光吸收观察的是构成物质的分子中的电子在分子轨道中的跃迁，属于分子吸收。2、能量两者有所同，又有所不同。定量分析的原则同，而测量所需的光能量不同：原子吸收为X射线，能量大，可激发电子从低的原子轨道向高的原子轨道跃迁。紫外可见吸收为紫外光及可见光，能量小，只能激发电子从分子轨道向最低（或次低）的空的分子轨道跃迁。通俗的说，原子吸收分光光度计是用较高的温度来燃烧分子，使之原子化（变为基态原子），再通过特征辐射，把基态原子激发，并吸收能量，通过这个能量差（透过率）来计算出度。而紫外—可见分光光度计是通过显色剂（一种能和我们被测元素产生络合反应的分子），与我们的被测元素产生反应，并且反应物分子带有特定的颜色，经过分子吸收氘灯（紫外区）或钨灯（可见区）的照射，吸收灯发射的能量，通过能量差（透过率）来计算出浓度。3、光源：紫外可见分光光度计使用的是钨灯或氘灯发射连续光谱。原子吸收分光光度计使用的是空心阴极灯发射特征波长的锐线光，选择性会更好。4、检测器。紫外_可见分光光度法，用吸收系数法定量，公式是什么？ A=ECL C=A/ELA为吸收度；T为透2113光率；E为吸收系数，采用的表5261示方法是（E1％1cm），其物理4102意义为当溶液1653浓度为1%（g/ml），液层厚度为1cm时的吸收度数值；C为100ml溶液中所含被测物质的重量（按干燥品或无水物计算），g；L为液层厚度，cm。紫外-可见分光光度法是在190~800nm波长范围内测定物质的吸光度，用于鉴别、杂质检查和定量测定的方法。当光穿过被测物质溶液时，物质对光的吸收程度随光的波长不同而变化。因此，通过测定物质在不同波长处的吸光度，并绘制其吸光度与波长的关系图即得被测物质的吸收光谱。从吸收光谱中，可以确定最大吸收波长λmax和最小吸收波长λmin。物质的吸收光谱具有与其结构相关的特征性。因此，可以通过特定波长范围内样品的光谱与对照光谱或对照品光谱的比较，或通过确定最大吸收波长，或通过测量两个特定波长处的吸收比值而鉴别物质。用于定量时，在最大吸收波长处测量一定浓度样品溶液的吸光度，并与一定浓度的对照溶液的吸光度进行比较或采用吸收系数法求算出样品溶液的浓度。原理可见光、紫外线照射某些物质，主要是由于物质分子中价电子能级跃迁对辐射的吸收，而产生化合物的可见紫外吸收光谱。基于物质对光的选择。紫外可见分光光度计怎么由吸光度计算含量？ 根据朗伯比尔定律得出：当一束平行单色光通过一定液层厚度的有色溶液时，由于溶质吸收了光能，光的强度就会减弱。溶液浓度越大，液层越厚，入射光越强，光被吸e5a48de588b6e799bee5baa631333431336161收的就越多。如果用公式表示的话，就可以表示为表示为：A=E*C*L（A为吸光度，C为溶液浓度，L为液层厚度）。E是物质在一定波长下的特征常数，与对光吸收的灵敏度呈正相关。该公式适用于有色溶液和均匀非散射的吸光物质（如：固、液、气）。在进行含量测定的时候，我们往往选择被测物质的最大吸收波长来作为使用波长，以防止外界干扰。于是，我们可以根据公式可以计算测定管中物质的含量，过程如下：A1=E1*C1*L1 A2=E2*C2*L2A1/(E1*C1)=A2/(E2*C2)由于标准液和待测液中的物质相同，故E1=E2∴C2=(A2/A1)*C1因为标准液和待测液的体积相等，物质含量m=C*V*M（M为相对分子质量，V为体积）故m2=（A2/A1)*m1所以溶液中物质的含量m2。扩展资料：在分光光度分析中，比尔定律是一个有限的定律，其成立条件是待测物为均一的稀溶液、气体等，无溶质、溶剂及悬浊物引起的散射；入射光为单色平行光。导致偏离朗伯-比尔定律的原因很多，但基本上可分为物理和化学两个方面。物理。紫外可见分光光度法的定性，定量分析的依据是什么 其依据为当2113光穿过被测物质溶液时，物5261质对光的吸收程度随光的波长不同而变4102化。1653紫外-可见分光光度法是在190～800nm波长范围内测定物质的吸光度，用于鉴别、杂质检查和定量测定的方法。光谱法（spectrometry）是基于物质与电磁辐射作用时，测量由物质内部发生量子化的能级之间的跃迁而产生的发射、吸收或散射辐射的波长和强度进行分析的方法。光谱法可分为发射光谱法、吸收光谱法、散射光谱法；或分为原子光谱法和分子光谱法；或分为能级谱，电子、振动、转动光谱，电子自旋及核自旋谱等。分光光度法是光谱法的重要组成部分，是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内的吸光度或发光强度，对该物质进行定性和定量分析的方法。常用的技术包括紫外-可见分光光度法、红外分光光度法、荧光分光光度法和原子吸收分光光度法等。扩展资料：对溶剂要求：含有杂原子的有机溶剂，通常均具有很强的末端吸收。因此，当作溶剂使用时，它们的使用范围均不能小于截止使用波长。例如甲醇、乙醇的截止使用波长为205nm。另外，当溶剂不纯时，也可能增加干扰吸收。因此，在测定供试品前，应先检查所用的溶剂在供试品所用的波长附近是否符合要求，即将溶剂置1cm。

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