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请问DNA聚合酶活性的测定方法是什么? DNA聚合酶酶活性测定

2020-10-12知识38

TaqDNA聚合酶是什么酶?其作用是什么? TaqDNA聚合酶 Taq DNA聚合酶是从一种水生栖热菌(Thermusaquaticus)yT1株分离提取的.yT是 一种嗜热真菌,能在70~75℃生长.该菌是1969年从美国黄石国家森林公园火山温泉中分离的。该酶基因全长2496个碱基,编码832个氨基酸,酶蛋白分子为 94KDa.其比活性为200000单位/mg.75~80℃时每个酶分子每秒钟可延伸约150个核苷 酸,70℃延伸率大于60个核苷酸/秒,55℃时为24个核苷酸/秒.温度过高(90℃以上)或过低(22℃)都可影响Taq DNA聚合酶的活性,该酶虽然在90℃以上几乎无DNA合成,但确有良好的热稳定性,在PCR循环的高温条件下仍能保持较高的活性.在92.5℃、95℃、97.5℃时,PCR混合物中的Taq DNA聚合酶分别经130min,40min和5~6min后,仍可 保持50%的活性,实验表明.PCR反应时变性温度为95℃~20sec,50个循环后,Taq DNA聚合酶仍有65%的活性.Taq DNA聚合酶的热稳定性是该酶用于PCR反应的前提条 件,也是PCR反应能迅速发展和广泛应用的原因.Taq DNA聚合酶还具有逆转录活性,其作用于类似逆转录酶.此活性温度一般为65~68℃,有Mn2+存在时,其逆转录活性 更高.TaqDNA聚合酶是Mg2+依赖性酶,该酶的催化活性对Mg2+浓度非常敏感.以活性程度 很低的鲑鱼精子DNA为模板,dNTP。

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DNA连接酶和DNA聚合酶的作用结果和用途 DNA连接酶的作用是连接DNA链之间的磷酸二酯键,使其成为一个完整的DNA分子.例如在基因工程中可将运载体与目的基因相连接,形成重组DNA分子.DNA聚合酶的作用是在DNA复制时将单个的脱氧核苷酸连接成脱氧核苷酸长链.

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请问DNA聚合酶活性的测定方法是什么? TAG:酶活性的测定方法2113 酶活性测定5261 硝酸还原酶活性测定 dna聚合酶4102 taq dna聚合酶 dna测定 dna浓度的测定 dna聚合酶的结构1653 dna定量测定 hbv dna测定值买二抗的时候发现,有些抗IgG的抗体还有分特异抗重链或者轻链,但是一般做二抗的好像没有分。请问各位大侠,这些有特异性的抗体能做二抗么?其结果跟一般的二抗有区别么?抗IgG是有三种二抗抗体:Whole IgG,抗轻链的针对F(ab’)2/Fab片段的IgG,抗重链的针对Fc片段的IgG。其中Whole IgG是完整的抗体分子,有一个Fc部分和两个与抗原结合的Fab部分,适.

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DNA聚合酶具备几种活性?用途是什么? [1]聚合作用:在引物RNA'-OH末端,以dNTP为底物,按模板DNA上的指令由DNApolⅠ逐个将核苷酸加上去,就是DNApolⅠ的聚合作用.酶的专一性主要表现为新进入的脱氧核苷酸必须与模板DNA配对时才有催化作用.dNTP进入结合位点.

【dna聚合酶】DNA聚合酶1和DNA聚合酶III有什么区别这2种酶有什么区别,分别用在什么地方,求大神指导:大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ(DNApolymeraseⅠ,DNAp?

请问DNA聚合酶活性的测定方法是什么?DNA聚合酶作用于单个的脱氧核苷酸的磷酸二酯键,而DNA连接酶作用于DNA片段间的磷酸二酯键。1、DNA连接酶:DNA连接酶也称DNA黏合酶,在。

DNA聚合酶具备几种活性?用途是什么? [1]聚合作用:在引物RNA'-OH末端,以dNTP为底物,按模板DNA上的指令由DNApolⅠ逐个将核苷酸加上去,就是DNApolⅠ的聚合作用。酶的专一性主要表现为新进入的脱氧核苷酸必须与模板DNA配对时才有催化作用。dNTP进入结合位点后,可能使酶的构象发生变化,促进3'-OH与5'-PO4结合生成磷酸二酯键。若是错误的核苷酸进入结合位点,则不能与模板配对,无法改变酶的构象而被3'-5'外切酶活性位点所识别并切除之。[2]3'→5'外切酶活性─校对作用:这种酶活性的主要功能是从3'→5'方向识别和切除不配对的DNA生长链末端的核苷酸。当反应体系中没有反应底物dNTP时,由于没有聚合作用而出现暂时的游离现象,从而被3'→5'外切酶活性所降解。如果提高反应体系的温度可以促进这种作用,这表明温度升高使DNA生长链3'末端与模板发生分离的机会更多,因而降解作用加强。当向反应体系加入dNTP,而且只加放与模板互补的上述核苷酸才会使这种外切酶活性受到抑制,并继续进行DNA的合成。由此推论,3'→5'外切酶活性的主要功能是校对作用,当加入的核苷酸与模板不互补而游离时则被3'→5'外切酶切除,以便重新在这个位置上聚合对应的核苷酸。在某些T4噬菌体突变株中DNA复制的真实性降低,而易发生。

#dna复制#引物设计#dna连接酶#dna提取#核苷酸

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