怎样配制 考马斯亮蓝G250蛋白染色剂 考马斯亮蓝G-250的配制：1.称取100 mg考马斯亮蓝G-250，溶于50 mL 90%乙醇中，2.加入85%的磷酸100 mL，3.最后用蒸馏水定容到1 000 mL。此溶液在常温下可放置一个月。扩展资料考马斯亮蓝有G250和R250两种。其中考马斯亮蓝G250由于与蛋白质的结合反应十分迅速，常用来作为蛋白质含量的测定。考马斯亮蓝R250与蛋白质反e68a847a686964616f31333431363031应虽然比较缓慢，但是可以被洗脱下去，所以可以用来对电泳条带染色。考马斯亮蓝法测定蛋白质含量流程：该方法用于大多数蛋白质的定量是比较精确的，但不适用于小分子碱性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污剂的浓度超过0．2%影响测定结果。如TritonX-100、SDS、NP-40等。1．Bradford浓染液的配制：将100mg考马斯亮蓝G-250溶于50ml 95%乙醇，加入100ml85%的磷酸，然后，用蒸馏水补充至200ml，此染液放4℃至少6个月保持稳定。2．标准曲线蛋白质样本的准备：尽量使用与待测样本性质相近的蛋白质作为标准品，例如测定抗体，可用纯化的抗体作为标准。如果待测样本是未知的，也可用抗体作为标准蛋白。通常在20ug—150ug/100ul之间绘制标准曲线。3．将待测样本溶于缓冲溶液中，该缓冲溶液应与制作标准曲线的缓冲。
关于蛋白质的聚丙烯酰胺的凝胶电泳的具体操作步骤，跪求！！！！
SDS-PAGE检测蛋白质分子量的基本原理 蛋白质在聚丙烯酰胺凝胶中电泳时，它的迁移取决于它所带电荷以及分子大小和形状等因素。在聚丙烯酰胺系统中加入阴离子去污剂十二烷基磺酸钠（SDS），大多数蛋白质能与SDS按。
丽春红染色液的配制及使用 最低0.27元开通文库会员，查看完整内容>；原发布者：tfxmdx丽春红（PonceauS）染色液的配制及使用MolecularFormula：C22H12N4Na4O13S4MolecularWeight：760.6CASNumber：6226-79-5λ：520nm（water）丽春红（PonceauS）也称猩红，可以用于PVDF膜、硝酸纤维素膜（nitrocellulosemembrane）和醋酸纤维素膜（celluloseacetatemembrane）上的蛋白的检测。丽春红带负电荷，可以与带正电荷的氨基酸残基结合，同时丽春红也可以与蛋白的非极性区相结合，从而形成红色的条带。丽春红染色的灵敏度不及考马斯亮蓝染色。丽春红对蛋白的染色是可逆的，染色后可以用蒸馏水，PBS或其它适当溶液洗去。因此，蛋白质N端测序时将SDS-PAGE胶上的蛋白转移到PVDF膜，用丽春红染色后将目的条带切下用于测序。注意：丽春红染色液不适用于尼龙膜上的蛋白的检测。使用说明将PVDF膜、硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜浸没在丽春红染色液中，摇动5-10分钟或更长时间；取出印迹膜，用蒸馏水，PBS或其它适当溶液漂洗2-3次，可出现清晰条带，记录结果；用蒸馏水，PBS或其它适当溶液漂洗2-3次，每次3-5分钟，去除丽春红，进行后续的WB检测。补充：丽春红染色液也可以直接用来染PAGE胶，不过e68a84e8a2ad62616964757a。
丽春红的使用方法 丽春红染色液的使用方法2113如下：1．取52611ml丽春红染色原液，加入去离子水10ml稀释备用4102。2．将PVDF膜、硝酸纤1653维素膜或醋酸纤维素膜浸没在丽春红染色液中，摇动3-10分钟或更长时间，直至出现清晰条带，记录结果。3．用蒸馏水，PBS或其它适当溶液漂洗2-3次，每次3-5分钟，去除丽春红，进行后续的WB检测。补充：丽春红染色液也可以直接用来染PAGE胶，不过，在染色之前最好用甲醇-乙酸溶液浸泡一下PAGE胶，起到固定蛋白的作用。
Western-blot操作步骤 Western，也称Western blot、Western blotting、Western印迹，是用抗体检测蛋白的重要方法之一。可按照以下步骤操作。1.收集蛋白样品(Protein sample preparation)使用细胞。
western blotting的原理、操作步骤及意义 一。免疫印迹法免疫印迹法（immunoblotting test，IBT）亦称酶联免疫电转移印斑法（enzyme linked immunoelectrotransfer blot，EITB），因与Southen早先建立的检测核酸的印迹方法Southen blot相类似，亦被称为Western blot。免疫印迹（western blotting）是在蛋白质电泳分离和抗原抗体检测的基础上发展起来一项检测蛋白质的技术。它将SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的高分辨力与抗原抗体反应的特异性相结合。典型的印迹实验包括三个步骤①蛋白质的电泳分离；②将电泳后凝胶上的蛋白质转移至固体膜上，用非特异性，非反应活性分子封闭固体膜上未吸附蛋白质区域；③免疫学检测。免疫印迹克服了聚丙烯酰胺凝胶电泳后直接在凝胶上进行免疫学分析的弊端，极大地提高了其利用率、分辨率和灵敏度，使其成为使用最广泛的免疫化学方法之一。第一阶段为SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）。抗原等蛋白样品经SDS处理后带阴电荷，在聚丙烯酰膪凝胶中从阴极向阳极泳动，分子量越小，泳动速度就越快。此阶段分离效果肉眼不可见（只有在染色后才显出电泳区带）。第二阶段为电转移。将在凝胶中已经分离的条带转移至硝酸纤维素膜上，选用低电压（100V）和大电流（1～2A），通电45min。
测定蛋白质分子量的常用方法 蛋白2113定量的测试方法有很多种，其5261中较为常见的有五种，4102分别是Bradford法、Bradford斑点试验、Coomassie 斑点试验、紫1653外分光度检测法及BCA法这五种。在生化实验中，对样品中的蛋白质进行准确可靠的定量分析，是经常进行的一项非常重要的工作。蛋白质是一种十分重要的生物大分子，它的种类很多，结构不均一，分子量又相差很大，功能各异，这样就给建立一个理想而又通用的蛋白质定量分析的方法带来了许多具体的因难。扩展资料蛋白定量分析也就涉及到生产科研的多个领域及行业，也是生物学科、食品检验及掺假掺伪、临床检验、诊断疾病和质量检验中最常见的方法。蛋白定量是生物学实验不可缺少的一部分。为验证细胞裂解是否成功，或为了将多个样品进行平行实验比较或标准化保存，需对细胞裂解液进行蛋白定量。为了判定蛋白的产量，需对纯化好的蛋白进行定量。为了将纯化好的蛋白用生物素或者报告酶进行标记，同样需首先对蛋白样品进行定量，以保证标记反应在适当的化学浓度下进行。参考资料来源：-蛋白定量
