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植物核蛋白提取配方 怎样提取植物的基因?

2020-10-11知识6

RNA的提取方法 1、酚抽提法:先2113用蛋酶K、SDS破碎5261细胞,消化蛋白,然后用酚和酚-氯萃取,高4102速离心后取1653上清,所得DNA大小为100-150kb2、甲酰胺解聚法:破碎细胞同上,然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合,再透析获得DNA可得DNA200kb左右。3、玻璃棒缠绕法:用盐酸胍裂解细胞,将裂解物铺于乙醇上,然后用带钩或U型玻璃棒在界面轻搅,DNA沉淀液绕于玻棒。生成DNA约80kb。4、异丙醇沉淀法:基本同1法,仅用二倍容积异丙醇替代乙醇,可去除小分子RNA(在异丙醇中可溶状态)5、表面活性剂快速制备法:用Triton X-100A或NP40表面活性剂破碎细胞,然后用蛋白酶K或酚去除蛋白,乙醇沉淀或透析。6、加热法快速制备:加热96℃-100℃,五分钟,然后离心后取上清,可用于PCR反应。7、碱变性快速制备:先用NaOH作用20分钟,再加HCI中和,离心后取上清,含少量DNA。扩展资料:DNA提取原则:1、保证核酸一级结构的完整性;2、核酸样品中不应存在对酶有抑制作用的有机溶剂和过高浓度的金属离子;3、其他生物大分子如蛋白质、多糖和脂类分子的污染应降低到最低程度;4、其他核酸分子,如RNA,也应尽量去除。参考资料来源:—DNA提取

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植物叶片蛋白的提取方法 一、植物组织蛋白质提取方法1、根据样品重量(1g样品加入3.5ml提取液,可根据材料不同适当加入),准备提取液放在冰上。2、把样品放在研钵中用液氮研磨,研磨后加入提取液中在冰上静置(3-4小时)。3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4、提取上清液,样品制备完成。蛋白质提取液:300ml1、1Mtris-HCl(PH8)45ml2、甘油(Glycerol)75ml3、聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinylpolypyrrordone)6g这种方法针对SDS-PAGE,垂直板电泳!二、氯醋酸—丙酮沉淀法1、在液氮中研磨叶片2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜,然后离心(4℃8000rpm以上1小时)弃上清。3、加入等体积的冰浴丙酮(含0.07%的β-巯基乙醇),摇匀后离心(4℃8000rpm以上1小时),然后真空干燥沉淀,备用。4、上样前加入裂解液,室温放置30分钟,使蛋白充分溶于裂解液中,然后离心(15℃8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准),可临时保存在4℃待用。5、用Brandford法定量蛋白,然后可分装放入-80℃备用。药品:提取液:含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮。裂解液:2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml灭菌的去离子水中(终体积为5ml),使用前再加入1M的DTT65ul/ml。这种。

植物核蛋白提取配方 怎样提取植物的基因?

怎样提取植物的基因? 核酸是生物有机体中的重要成分,在生物体中核酸常与蛋白质结合在一起,以核蛋白的形式存在.核酸分为脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)两大类,在真核细胞中,前者主要存在于。

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亲核蛋白进核机制 核蛋白nucleoprotein结合蛋白质中的2113一类。普5261遍存在于各种生物的细胞核中4102的特殊形态的蛋白质,由核酸1653与组蛋白、精蛋白等的碱性蛋白结合而成为细胞核的主要成分。根据核酸种类不同,可分为核糖核酸核蛋白和脱氧核糖核酸核蛋白。可从细胞核中提取得到,能溶解于1mol/L NaCl溶液中。核蛋白中的蛋白质包括组蛋白(或精蛋白)和非组蛋白蛋白质。组蛋白含碱性氨基酸如精氨酸、赖氨酸等丰富的碱性蛋白,带正电荷。精蛋白仅出现于真核细胞中,含较多的天门冬氨酸、谷氨酸等酸性氨基酸,是酸性蛋白,带负电荷。一类由蛋白质和核酸结合而成的复合蛋白质。存在于一切生物。病毒是一类极简单的生物,它们的化学本质就是核蛋白。细胞中核蛋白主要存在于染色体和核糖体中。由于核酸有DNA和RNA两类,核蛋白也因而分为DNA-核蛋白和RNA-核蛋白两类。DNA-核蛋白主要存在于细胞核内,RNA-核蛋白主要存在于核糖体中。两类核蛋白的许多理化性质相似,都能被碱性染料染色,都不稳定,在热或碱的作用下易分解为核酸及蛋白质。DNA-核蛋白的粘性较强,不溶于等渗食盐溶液,溶于离子强度极低的盐溶液;RNA-核蛋白能溶于等渗食盐溶液。组成核蛋白的蛋白质部分主要是组蛋白和精。

蛋白质分离纯化的四种方法 1、盐析法:2113盐析法的根据是蛋白质在稀盐溶液中5261,溶解度会随盐浓度的4102增高而上升,但当盐浓度增高到一定数值1653时,使水活度降低,进而导致蛋白质分子表面电荷逐渐被中和,水化膜逐渐被破坏,最终引起蛋白质分子间互相凝聚并从溶液中析出。2、有机溶剂沉淀法:有机溶剂能降低蛋白质溶解度的原因有二:其一、与盐溶液一样具有脱水作用;其二、有机溶剂的介电常数比水小,导致溶剂的极性减小。3、蛋白质沉淀剂:蛋白质沉淀剂仅对一类或一种蛋白质沉淀起作用,常见的有碱性蛋白质、凝集素和重金属等。4、聚乙二醇沉淀作用:聚乙二醇和右旋糖酐硫酸钠等水溶性非离子型聚合物可使蛋白质发生沉淀作用。扩展资料:蛋白质是生命的物质基础,是有机大分子,是构成细胞的基本有机物,是生命活动的主要承担者。没有蛋白质就没有生命。氨基酸是蛋白质的基本组成单位。它是与生命及与各种形式的生命活动紧密联系在一起的物质。机体中的每一个细胞和所有重要组成部分都有蛋白质参与。蛋白质占人体重量的16%~20%,即一个60kg重的成年人其体内约有蛋白质9.6~12kg。人体内蛋白质的种类很多,性质、功能各异,但都是由20多种氨基酸(Amino acid)按不同比例组合而成的。

植物蛋白质的提取方法基本上有这几种:盐析法、有机溶剂法和等电点法。1、盐析法原理:盐析法是指在药物溶液中加入大量的无机盐,使某些高分子物质的溶解度降低沉淀析出,而与其他成分分离的方法。盐析法主要用于蛋白质的分离纯化。常作盐析的无机盐有硫酸钠、硫酸镁、硫酸铵等。2、有机溶剂法原理:机溶剂引起蛋白质沉淀的主要原因是加入有机溶剂使水溶液的介电常数降低,因而增加了两个相反电荷基团之间的吸引力,促进了蛋白质分子的聚集和沉淀。有机溶剂引起蛋白质沉淀的另一种解释认为与盐析相似,有机溶剂与蛋白质争夺水化水,致使蛋白质脱除水化膜,而易于聚集形成沉淀。3、等电点法原理:在等电点时,蛋白质分子以两性离子形式存在,其分子净电荷为零(即正负电荷相等),此时蛋白质分子颗粒在溶液中因没有相同电荷的相互排斥,分子相互之间的作用力减弱,其颗粒极易碰撞、凝聚而产生沉淀,所以蛋白质在等电点时,其溶解度最小,最易形成沉淀物。等电点时的许多物理性质如黏度、膨胀性、渗透压等都变小,从而有利于悬浮液的过滤。

水煮法提取DNA 的详细过程 水煮法提取DNA【试剂】2113缓冲液和溶液:用于筛5261选质粒的抗生素;氯4102霉素(34mg/ml);选1653用:乙醇;异丙醇(PH8.0)酶和缓冲液:溶菌酶(10mg/ml);限制性内切核酸酶凝胶:琼脂糖凝胶【实验操作过程】1、将500ml 培养物的细菌沉淀物重悬于用冰预冷的10mlSTET【(0.1mol/L NaCl10mmol/LTris·Cl(pH8.0)1mmol/L EDTA(pH 8.0)】中。将悬液移入50ml锥瓶中。2、加入1ml新配制的溶菌酶溶液[10mg/ml,沉淀于10mmol/LTris.Cl(pH8.0)]。如溶液的pH值低于0.8溶菌酶不能有效地发挥作用。3、用一个夹子把锥瓶放在酒精灯的明火上加热,直至液体恰好开始沸腾,不停地摇晃锥瓶。4、立即把瓶浸入装有沸水的大烧杯(2L)中,将瓶放在沸水中,时间恰为40s。5、将瓶浸入用冰预冷的水中5min,使之冷却。6、将粘稠状内容物从瓶中转移到超离心管,于4℃以30000rpm离心30min。原有的细菌物生长得越密,应越难将粘稠状裂解物转移到离心管中。必要时,可用长刀片和剪刀将裂解物剪成大小适于操作的大团块,或抽入10ml注射器的针筒中使之部分剪切。从用氯霉素处理的细菌培养物中分离质粒DNA时,一般不会出现这样的问题。如果细菌碎片没能形成紧密的团块,可以以35000。

植物DNA提取原理? 通常采用机械研磨的方法破碎植物的组织和细胞,由于植物细胞匀浆含有多种酶类(尤其是氧化酶类)对DNA的抽提产生不利的影响,在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强还原剂(如巯基乙醇)以降低这些酶类的活性.在液氮中研磨,材料易于破碎,并减少研磨过程中各种酶类的作用.十二烷基肌酸钠(sarkosyl)、十六烷基三甲基溴化铵(hexadyltrimethyl ammomum bromide,简称为CTAB)、十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate,简称SDS)等离子型表面活性剂,能溶解细胞膜和核膜蛋白,使核蛋白解聚,从而使DNA得以游离出来.再加入苯酚和氯仿等有机溶剂,能使蛋白质变性,并使抽提液分相,因核酸(DNA、RNA)水溶性很强,经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质.上清液中加入无水乙醇使DNA沉淀,沉淀DNA溶于TE溶液中,即得植物总DNA溶液.

核蛋白的详细内容 nucleoprotein 结合蛋白质中的一类。普遍存在于各种生物的细胞核中的特殊形态的蛋白质,由核酸与组蛋白、精蛋白等的碱性蛋白结合而成为细胞核的主要成分。。

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