ZKX's LAB

提取动物组织DNA跑琼脂糖凝胶拖尾原因是什么? rna跑胶之后有拖尾

2020-10-11知识10

提取的总RNA跑胶从大到小有几条带

提取动物组织DNA跑琼脂糖凝胶拖尾原因是什么? rna跑胶之后有拖尾

PCR跑胶,目的条带很亮,但是边沿不清楚,前后有拖尾现象,请教各位是什么原因? 博凌科为-为你解答:1模板可能有降解,建议避免反复冻融,放置时间不能太长。模板的质量是最重要的。2抽提RNA时有污染,包括基因组DNA污染和蛋白质污染,需重 做抽提。3提高退火温度,减少非特异性扩增。4减少循环次数,减少非特异性扩增。5电泳缓冲液时间太长,ph值和盐离子浓度明显 改变。6电泳时电压不能太高,8V/cm。7一般来讲,基于promega和TaKaRa的PCR反应体系中,Mg和dNTP的浓度是相 匹配的,不需改动。8 加样量过大。过多的量会造成加样孔超载,从而导致拖尾和弥散,对于较大的DNA此现象更明显。9制胶过程中胶孔没 制好。10 EB没有冲洗干净。11模板混有基因组DNA,或模板中混有蛋白。12非特异反映。引物设计的不好,非特异,这种情 况容易出现非特异扩增造成有非特异性扩增带或拖尾现象。13电泳液用久了不换,电泳胶脏了。14扩增的条件不合适,一般退火温度低时容 易使引物在非特异位置结合引发扩增反应造成拖尾。针对以上情况,可以先提高退火温度试试,如果实在不行,再看看引物是不是合适。如果 内参可以扩出来,只能说明程序可能是适合的,但不能完全说明体系合适。体系内的各组分,如模板、dNTP、Mg离子、引物等都可能造成拖尾。先得考虑换了 那种成分。

提取动物组织DNA跑琼脂糖凝胶拖尾原因是什么? rna跑胶之后有拖尾

怎样做RNA的琼脂糖凝胶电泳,RNA样品电泳后,可见28S、18S及5S小分子RNA条带,则说明完整性好。若有降解可能是操作不当或污染了RNae.28S和18SRNA比值约为2:1,表明RNA无。

提取动物组织DNA跑琼脂糖凝胶拖尾原因是什么? rna跑胶之后有拖尾

提取动物组织DNA跑琼脂糖凝胶拖尾原因是什么? 提取了鱼鳍组织DNA最左边是DL2000marker,后几个为样品,电压为120v,30min,百分之一的琼脂糖凝胶,上样…

求教高手!!基因组DNA电泳现象:电泳图分析一下(分布不均的原因,移动速率的影响因素)还有偶的结果 你的这个电泳图基本上都可以看到主条带,从上往下第一条很清晰的条带就是基因组DNA,这条条带除了二号基本是比较完整而明亮的,做下游操作基本没啥问题。二号不是没有,。

PCR实验过程中的注意事项 PCR产物的电泳检测时间 一般为48h以内,有些最好于当日电泳检测,大于48h后带型不规则甚至消失.PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备,②引物的质量与特异性,③酶的质量及,④PCR循环条件.寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究.酶切分析:根据PCR产物中限制性内切酶的位点,用相应的酶切、电泳分离后,获得符合理论的片段,此法既能进行产物的鉴定,又能对靶基因分型,还能进行变异性研究.分子杂交:分子杂交是检测PCR产物特异性的有力证据,也是检测PCR 产物碱基突变的有效方法.Southern印迹杂交:在两引物之间另合成一条寡核苷酸链(内部寡核苷酸)标记后做探针,与PCR产物杂交.此法既可作特异性鉴定,又可以提高检测PCR产物的灵敏度,还可知其分子量及条带形状,主要用于科研.斑点杂交:将PCR产物点在硝酸纤维素膜或尼膜薄膜上,再用内部寡核苷酸探针杂交,观察有无着色斑点,主要用于PCR产物特异性鉴定及变异分析.氯仿抽提掉蛋白质和其它细胞组份,用乙醇或异丙醇沉淀 核酸.提取的核酸即可作为模板用于PCR反应.一般临床检测标本,可采用快速简便的方法溶解细胞,裂解病原体,消化除去染色体的蛋白质使靶基因游离,直接用于PCR扩增.RNA模板提取一般采用异硫氰酸胍或蛋白酶K法,要防止RNase降解。

提取DNA后为什么要跑胶 通过跑胶看看提取的DNA的长度,有没有很多断裂(跑胶后表现为拖尾严重),以及浓度(条带亮不亮),有没有RNA污染(表现为100bp一下还有一团一团的条带)

有关质粒琼脂糖凝胶电泳图分析? 这是提取质粒后刚做的琼脂糖凝胶电泳,但是老师没教我们怎么分析,我的是右数第3个泳道,第4个是marker,…

琼脂糖凝胶电泳跑完,DNA条带颜色浅怎么回事? 谁能解释一下胶浓度与DNA条带颜色深浅的关系?还有,有时也会出现条带模糊不清,弥散的现象。

#dna提取#科学#科普#pcr#蛋白电泳

随机阅读

qrcode
访问手机版