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page胶跑dna条带拖尾 用PAGE胶跑DNA

2020-10-09知识23

DNA琼脂糖凝胶电泳出现拖尾的原因是什么 电泳出现拖尾现象2113,英文成为smear,就是5261弥散.其原因,主要从以下两4102个方面考虑:1、PCR产物1653自身原因:往往由于酶量过多或酶的质量差,dNTP浓度过高,Mg2+浓度过高,退火温度过低,循环次数过多,而造成PCR的非特异性产物 过多.对策:①减少Taq酶的量,或调换另一来源的酶.②减少dNTP的浓度.③适当降低Mg2+浓度.④增加模板量,减少引物的用量,减少循环次数,提高退火温度.2、电泳体系的问题:(1)电泳缓冲液TAE或者TBE的污染,建议更换缓冲液.(2)上样时样品漂了,建议增加上样缓冲液的用量,以及小心加样.(3)电压太高.(4)适当把你的胶的浓度加大.(根据你的片断大小而定)(5)观察你的marker是否也存在拖尾现象,作为对照.以前有挺多人问过这个问题了 借用下以往问题的最佳答案

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跑dna电泳出现拖尾现象,不知道为何? 你的2113情况,应该从以下两个方面找原因:1.一般来说,5261marker除了能检测DNA的分子4102质量外,还可以侧面1653反应你的胶是否制的成功,从你的图上看,胶的问题比较大一些,胶的浓度和你溶胶的时间以及最后的溶解情况都有一些关系,跑过pcr后分子大小等出现了变化,也可能是受到了空气的污染等,为了检测你的maker是否有问题,可以在同块胶上点上别的MAKER,或者请别人帮你制胶后再跑一下。2.镁离子的浓度问题,镁离子浓度不合适本身就很容易拖尾,前8个样在跑PCR的时候都加了镁离子,而总DNA没有,这也是他们的区别,也可以从这点找找原因。

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琼脂糖凝胶电泳跑的DNA和Marker都出现拖尾,这是什么原因导致的,怎么改进呢? 如图,从右到左依次是4ul marker和9ulDNA,DNA条带很浅,为什么会出现这些情况呢?

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用PAGE胶跑DNA 首先原理差不多,具体细节2113差异还是有的。5261跑DNA的话,可以参见 人家做AFLP的protocol,当然也要看4102你想分1653离的片断大小咯。两者都要用到丙烯酰胺、甲叉丙烯酰胺、TEMED、APS(10%)但是跑DNA一般用 TBE(Tris、硼酸、EDTA),还含尿素用于western的蛋白胶多用 Tris-HCl,SDS buffer。蛋白较一般有分离胶和浓缩胶。浓度看分离的东西;上样量的话其实没法比较,染色的方法不一样,DNA银染的话少上点,具体多少我也记不清了,自己查一下吧;如果说是上样体积,看你的梳子大小咯电压:AFLP要求DNA要预电泳,冲洗掉尿素后再插梳子,60W 2h;当二甲苯青跑到底部约1/3处终止电泳。DNA的loading buffer含染料 溴酚蓝、二甲苯青等来指示跑到哪里呢。

求助啊,DNA跑PAGE跑不下来

琼脂糖凝胶电泳跑的DNA为什么会拖尾? 看里的答案里提到PCR产物自身原因:往往由于酶量过多或酶的质量差,dNTP浓度过高,Mg2+浓度过高,退…

琼脂糖凝胶电泳跑的DNA为什么会拖尾 由于酶量过多或酶的质量差,dNTP浓度过高,Mg2+浓度过高,退火温度过低,循环次数过多,而造成PCR的非特异性产物 过多。对策:减少Taq酶的量,或调换另一来源的酶;减少dNTP的浓度;适当降低Mg2+浓度;增加模板量,减少引物的用量,减少循环次数,提高退火温度。琼脂糖的熔点在62?65°C之间,融化后在37°C下可维持液态数小时,30°C时凝固成胶。多用于对染色体DNA在凝胶内进行原位酶切及DNA片段回收。琼脂糖凝胶 由于孔径大常用于大分子蛋白质、DNA的分离。扩展资料:琼脂糖凝胶是依靠糖链之间的次级链如氢键来维持网状结构,网状结构的疏密依靠琼脂糖的浓度。一般情况下,它的结构是稳定的,可以在许多条件下使用(如水,pH4-9范围内的盐溶液)。琼脂糖凝胶在40℃以上开始融化,也不能高压消毒,可用化学灭菌活处理。把琼脂糖,即几乎不含硫酸根的主要成分为多糖的琼脂,溶于热水,冷却制成的凝胶。制成的小颗粒用于凝胶过滤。参考资料来源:-琼脂糖凝胶

#dna#蛋白电泳#dna变性#电泳

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