集落形成和细胞增殖实验有什么区别 细胞集落形成实验2113非整倍体无限细胞5261系和癌细胞株中，仍4102然存在不同细胞亚群，它们的1653功能和生长特点有些差异，其中有些亚群细胞对培养环境有较大的适应性和具有较强的独立生存能力，细胞集落率高。纯化细胞群来自一个共同的祖细胞，细胞遗传性状、生物学特性相似，利于实验研究。原代培养细胞和二倍体有限细胞系，细胞集落率很低。细胞集落化培养之前，应先测定细胞集落形成率，以了解细胞在极低密度条件下的生长能力。目前认为仅有肿瘤干细胞具有形成集落的能力，集落抑制率常用于抗癌药物敏感试验、肿瘤放射生物学试验。集落抑制率=（1-（实验组集落形成率/对照组集落形成率））×100%（一）原理细胞集落形成率 单个细胞在体外增殖6代以上，其后代所组成的细胞群体，称为集落或克隆。每个克隆含有50个以上的细胞，大小在0.3-1.0mm 之间。集落形成率表示细胞独立生存能力。常用方法有平板集落形成试验、软琼脂集落形成试验。（二）实验用品1.材料：Hela细胞。2.器材：（直径 60mm）培养皿、细胞记数板、烧杯、吸管、离心机、离心管、废液瓶、倒置显微镜、二氧化碳培养箱、超净工作台、水浴锅。3.试剂：Giemsa染液、0.25%胰蛋白酶消化液、血清细胞。
平板接种的方法，平板接种即用接种环将菌种接至平板培养基上，或用移液管、滴管将一定体积的菌液移至平板培养基上，然后培养。平板接种的目的是观察菌落形态，分离纯化菌种，。
平板克隆形成和软琼脂克隆形成的区别 细胞克隆形成e68a847a686964616f31333363373730率即细胞接种存活率，表示接种细胞后贴壁的细胞成活并形成克隆的数量。贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆，而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。平板克隆形成和软琼脂克隆形成主要是实验步骤和方法的区别和适用情况的区别。平板克隆形成实验基本步骤：1、取对数生长期的各组细胞，分别用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成单个细胞，并把细胞悬浮在10%胎牛血清的DMEM培养液中备用。2、将细胞悬液作梯度倍数稀释，每组细胞分别以每皿50、100、200个细胞的梯度密度分别接种含10mL 37℃预温培养液的皿中，并轻轻转动，使细胞分散均匀。置37℃ 5%CO2及饱和湿度的细胞培养箱中培养2～3周。3、经常观察，当培养皿中出现肉眼可见的克隆时，终止培养。弃去上清液，用PBS小心浸洗2次。加4%多聚甲醛固定细胞5mL固定15分钟。然后去固定液，加适量GIMSA应用染色液染10～30分钟，然后用流水缓慢洗去染色液，空气干燥。4、将平皿倒置并叠加一张带网格的透明胶片，用肉眼直接计数克隆，或在显微镜（低倍镜）计数大于10个细胞的克隆数。最后计算克隆形成率。克隆形成率=。
单克隆抗体制备的基本原理与过程？有什么意义 原理：B淋巴细胞在抗2113原的刺激下，能够分化5261、增殖形4102成具有针对这种抗原分泌特异性抗体的1653能力。B细胞的这种能力和量是有限的，不可能持续分化增殖下去，因此产生免疫球蛋白的能力也是极其微小的。将这种B细胞与非分泌型的骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞，再进一步克隆化，这种克隆化的杂交瘤细胞是既具有瘤的无限生长的能力，又具有产生特异性抗体的B淋巴细胞的能力，将这种克隆化的杂交瘤细胞进行培养或注入小鼠体内即可获得大量的高效价、单一的特异性抗体。这种技术即称为单克隆抗体技术。过程1）免疫脾细胞的制备 制备单克隆抗体的动物多采用纯系 Balb/c小鼠。免疫的方法取决于所用抗原的性质。免疫方法同一般血清的制备，也可采用脾内直接免疫法。2）骨髓瘤细胞的培养与筛选 在融合前，骨髓瘤细胞应经过含8-AG的培养基筛选，防止细胞发生突变恢复HGPRT的活性（恢复HGPRT的活性的细胞不能在含8-AG的培养基中存活）。骨髓瘤细胞用10%小牛血清的培养液在细胞培养瓶中培养，融合前24h换液一次，使骨髓瘤细胞处于对数生长期。3）细胞融合的关键：1技术上的误差常常导致融合的失败。例如，供者淋巴细胞没有查到免疫应答。这必然要失败的。2融合试验。
克隆形成试验的问题 博凌科为解答：做克隆形成实验首先需要在平皿或孔板中接种相同数量的处理过的细胞，所以需要计数细胞后再种于平皿或孔板中。如果在放疗之前就接种细胞，则经过放疗后，就 不能保证成活的细胞数量是相同的，因而在计算克隆形成率时分母则不一致。而计数活细胞的目的是为了将经过放疗后已经死亡的细胞过滤掉，只计数活细胞，将活 细胞种于平皿或孔板中。经过大概两周的时间，观察细胞的克隆形成情况，克隆形成超过50个的计为一个克隆，计数不同处理的细胞可克隆形成个数，从而得到不 同放疗剂量对细胞的影响程度。
平板划线法的步骤 1．融化培养基：牛肉2113膏蛋白胨琼脂培养基放入5261水浴中加热至融化4102。2．倒平板：待培养基冷却1653至50℃左右，按无菌操作法倒2只平板(每皿约15m1)，平置，待凝固。倒平板的方法：右手持盛培养基的试管或三角瓶置火焰旁边，用左手将试管塞或瓶塞轻轻地拨出，试管或瓶口保持对着火焰；然后用右手手掌边缘或小指与无名指夹住管(瓶)塞(也可将试管塞或瓶塞放在左手边缘或小指与无名指之间夹住。如果试管内或三角瓶内的培养基一次用完，管塞或瓶塞则不必夹在手中)。左手拿培养皿并将皿盖在火焰附近打开一缝，迅速例入培养基约15m1，加盖后轻轻摇动培养皿，使培养基均匀分布在培养皿底部，然后平置于桌面上，待凝后即为平板。3．作分区标记在皿底将整个平板划分成A、B、C、D四个面积不等的区域。各区之间的交角应为120℃左右（平板转动一定角度约60℃），以便充分利用整个平板的面积，而且采用这种分区法可使D区与A区划出的线条相平行，并可避免此两区线条相接触。4．划线操作(1)挑取他含菌样品：选用平整、圆滑的接种环，按无菌操作法挑取少量菌种。(2)划A区：将平板倒置于煤气（酒精）灯旁，左手拿出皿底并尽量使平板垂直于桌面，有培养基一面向着煤气灯(这时皿盖。
单克隆抗体是由什么细胞产生 1975年分子生物学家G.J.F.克勒和C.米尔斯坦在自然杂交技术的基础上，创建立杂交瘤技术，他们把可在体外培养和大量增殖的小鼠骨髓瘤细胞与经抗原免疫后的纯系小鼠脾细胞融合。
细胞系生长过程有哪些主要阶段，每个阶段细胞各有什么特点 你好。你这是2113细胞工程学？如5261下：答：进行正常细胞培4102养时，不论细胞的种类和供1653体的年龄如何，细胞系的生长过程都经历原代培养期、传代培养期和衰退期（或永生化）三个阶段。①代培养期也称初代培养期，即从体内取出组织接种培养到第一次传代阶段，一般持续1～4周，此期细胞呈活跃的移动，可见细胞分裂，但不旺盛。原代培养细胞与体内原组织在形态结构和功能活动相似性较大，细胞相互依存性强。如把这种细胞群稀释分散成单细胞，在软琼脂培养基中进行培养时，细胞克隆形成率很低，即细胞独立生存性差。②原代细胞生长一定时间后，如是贴附型细胞就会连接成片而铺满瓶底，这时需将原代细胞分开至多个新的培养瓶中，这个过程称为传代。初代培养细胞一经传代后便改称做细胞系。此期细胞增殖旺盛，可见细胞分裂相，并能维持二倍体核型。传代培养细胞与体内原组织在形态结构和功能活动发生较大改变。一般情况下当传代10～50次左右，细胞增殖逐渐缓慢，以至完全停止，细胞进入第三期。③衰退期的细胞仍然生存，但增殖很慢或不增殖；细胞形态轮廓增强，最后衰退凋亡。在细胞生命期阶段，少数情况下，在以上三期任何一点(多发生在传代末或衰退期)，由于某种。
求一步克隆法的具体实验步骤 分子克隆实验流程 第一天 一：目的片段的扩增（PCR）PCR反应的基本成分包括：模板DNA(待扩增DNA)、引物、4种脱氧核苷酸(dNTPs)、DNA聚合酶和适宜的缓冲液。PCR由变性-退火-。
