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聚合酶活性 DNA聚合酶具备几种活性?用途是什么?

2020-10-07知识9

DNA聚合酶具备几种活性?用途是什么?

聚合酶活性 DNA聚合酶具备几种活性?用途是什么?

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聚合酶活性 DNA聚合酶具备几种活性?用途是什么?

DNA聚合酶具备几种活性?用途是什么? [1]聚合作用:在引物RNA'-OH末端,以dNTP为底物,按模板DNA上的指令由DNApolⅠ逐个将核苷酸加上去,就是DNApolⅠ的聚合作用。酶的专一性主要表现为新进入的脱氧核苷酸必须与模板DNA配对时才有催化作用。dNTP进入结合位点后,可能使酶的构象发生变化,促进3'-OH与5'-PO4结合生成磷酸二酯键。若是错误的核苷酸进入结合位点,则不能与模板配对,无法改变酶的构象而被3'-5'外切酶活性位点所识别并切除之。[2]3'→5'外切酶活性─校对作用:这种酶活性的主要功能是从3'→5'方向识别和切除不配对的DNA生长链末端的核苷酸。当反应体系中没有反应底物dNTP时,由于没有聚合作用而出现暂时的游离现象,从而被3'→5'外切酶活性所降解。如果提高反应体系的温度可以促进这种作用,这表明温度升高使DNA生长链3'末端与模板发生分离的机会更多,因而降解作用加强。当向反应体系加入dNTP,而且只加放与模板互补的上述核苷酸才会使这种外切酶活性受到抑制,并继续进行DNA的合成。由此推论,3'→5'外切酶活性的主要功能是校对作用,当加入的核苷酸与模板不互补而游离时则被3'→5'外切酶切除,以便重新在这个位置上聚合对应的核苷酸。在某些T4噬菌体突变株中DNA复制的真实性降低,而易发生。

聚合酶活性 DNA聚合酶具备几种活性?用途是什么?

什么是DNA聚合酶? DNA聚合酶的种2113类很多,它们在细胞中的5261DNA复制过程中起4102着重要的作用。DNA聚合酶有DNA聚合酶Ⅰ、Ⅱ1653、Ⅲ三类。基因工程中很多步骤都需要DNA聚合酶催化DNA体外合成反应,这些酶作用时大多都需要模板,合成产物的序列与模板互补。基因工程常用的DNA聚合酶有:①大肠杆菌聚合酶Ⅰ(全酶);②大肠杆菌聚合酶Ⅰ大片段(Klenow片段);③T4噬菌体DNA聚合酶;④T7噬菌体聚合酶及经修饰的T7噬菌体聚合酶(测序酶),⑤耐热DNA聚合酶(TaqDNA聚合酶);⑥末端转移酶(末端脱氧核苷酸转移酶,也属DNA聚合酶);⑦逆转录酶(依赖于RNA的DNA聚合酶)。DNA聚合酶Ⅰ是基因工程中最常用的工具酶。DNA聚合酶Ⅱ是一条120kD的肽链,催化5′3′方向合成DNA,也具有3′5′外切酶活性但没有5′3′外切酶活性。可能在当细胞DNA受到化学或物理损伤时,DNA聚合酶Ⅱ在修复过程中起特殊作用。DNA聚合酶Ⅲ全酶是一种大于250kD,由多种亚基组成的蛋白质,它是不对称的二聚体,两个亚基可分别同时催化前导链(leadingstrand)及后随链的合成。DNA聚合Ⅲ与DNA聚合酶Ⅰ相同,也具有3′5′外切酶活性。在DNA聚合作用中,核苷酸添加的错误率达1/1000。由于DNA聚合酶Ⅰ和DNA聚合酶Ⅲ全酶的3′5′外切酶。

的DNA聚合酶,具有三种酶活性分别是什么?

DNA聚合酶I有哪些活性? emphasis:role=italicE.coliemphasis:DNA聚合酶I为单链多肽,分子量109ku,有四种活性。(1)5′3′DNA聚合酶活性:反应底物为单链DNA及引物(带3′-OH基)或5′突出的双。

DNA聚合酶有哪些活性? Klenow:DNA聚合酶是emphasis:role=italicE.coliemphasis:DNA聚合酶I经裂解而除去全酶中的5′3′外切活性的肽段后,所剩余的分子量为76ku大片段,而聚合活性和3′5′外切活性不受影响,因此该片段也称为Klenow片段(Klenow:fragment),或emphasis:role=italicE.coliemphasis:DNA聚合酶I大片段(emphasis:role=italicE.coliemphasis:DNA:polymeraseI:large:fragment)。Klenow:DNA聚合酶的活性与emphasis:role=italicE.coliemphasis:DNA聚合酶I的活性是一致的,由于没有5′3′外切活性,而在现代基因工程操作中使用范围进一步扩大。Klenow:片段的主要用途是:①:补平限制酶切割DNA后产生的3′凹端;②:用[superscript32superscriptP]dNTP对DNA片段的3′凹端进行末端标记;③在cDNA克隆中,用于合成cDNA第二链;④应用Sanger双脱氧链末端终止法进行DNA测序。除了以上作用外,KlenowDNA聚合酶在cDNA克隆中合成第二链,随机引物标记,应用于PCR反应,在体外诱变中等也有非常重要的应用。

DNA聚合酶的主要活性是什么? DNA聚合酶的主要活性是催化DNA的合成(在具备模板、引物、dNTP等的情况下)及其相辅的活性

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