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荧光定量PCR与普通PCR相比有哪些不同 pcr不大好

2020-10-05知识13

实时定量PCR的结果是怎样分析的

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荧光定量PCR与普通PCR相比有哪些不同

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PCR失败的原因及如何改善 一、模板2113质量问题:1)模板提5261取不完整,其中不含你的目的基4102因,或目的基因含量太低。可以跑个电1653泳看看提取的DNA,PCR阳性样品与阴性样品是否有明显差别。如果确定是这种问题,可以增加模板量试试,但不一定行得通。2)模板里面残留某种试剂成份,可能抑制Taq聚合酶的活性,如果是这种情况,可以用试剂盒把模板再纯化一下,或将模板做个梯度稀释以确定最佳的模板量。3)为什么跑电泳会出现拖带呢?1.有可能的因为你的电压调的太高了。电泳跟很多因素有关,其中就有一个是电压,在适当的电压范围内增加是可以加快迁移速率,但是要是超到一个临界值反而有害。你可以适当的调低点看看。2.有时候发现上样量太多的话会有拖带。你看能否回收之后,按1:50 或1:100 等稀释后,再当成模板扩一次怎么样。二、引物问题1)样品自身的基因型差异导致扩增失败。也就是说你的引物与某些基因型的样品结合的好,而和另一些基因型结合不好。可以换一对更保守的引物试试。祝顺利!2)普通PCR所用的一对引物中有一个引物加多了,为正常的三倍只要引物特异性比较好,那么不会产生大的影响。如果恰巧是加多的这条引物不是很特异的话,也许会扩出来非特异带。在制备单链。

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PCR延伸时间是不是和扩增片段大小有关 有关。3.6kb并不大,应该不难。PCR延伸时间上,实验室一般用95℃/30秒变性,55℃/45秒退火,用的是95℃/20秒变性,55℃/30秒退火。上面说的是常用的条件,如果扩增不出来就。

pcr可以准备的检测到hpv吗!!!! 尖锐湿疣初起为细小淡红色丘疹,以后逐渐增大增多,单个或群集分布,湿润柔软,表面凹凸不平,呈乳头样、鸡冠状或菜花样突起。红色或污灰色。根部常有蒂,且易发生糜烂渗液。

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