用mrna制cdna必须使用的酶

mrna经过逆转录酶作用得到cdna，那cdna是rna和dna杂交体吗？还是dna单链，双链？那 cDNA：具有与某mRNA(信使RNA)链呈互补的碱基序列的单链DNA即complementary DNA的缩写。既然cDNA是DNA单链，那就要用DNA水解酶 获得mRNA-cDNA复合体和cDNA的过程都是酶促反应,此过程为什么会形成冈崎片段呢? 过程中要用到DNA连接酶 冈崎片段是DNA双链复制时,由于一条链的方向正好是5'到3',而另一条要3'到5',所以在同一个DNA聚合酶的行进方向上出现前导链和后随链,后随链由于DNA聚合酶箍钳扭转方向之后的... 利用逆转录酶和mRNA模版合成cDNA的主要步骤是什么 1、以mRNA为模板,以四种脱氧核苷酸作原料,在逆转录酶作用下,合成DNA单链 2、以DNA单链为模板,以四种脱氧核苷酸作原料,继续合成DNA另一条链,两条DNA链形成cDNA 由mRNA-cDNA复合体合成cDNA为什么需要RNA酶? 确实需要RNA酶，但是RNA酶的作用是水解RNA不是合成mRNA~cDNA文库的建立流程：提取mRNA—cDNA第一条链的合成—cDNA第二条链的合成—cDNA末端处理cDNA第一条链的合成：在这... cDNA文库必须满足什么条件?其构建包括哪些步骤? 条件：1、要使用mRNA经过反转录PCR产生cDNA。2、要进一步获得cDNA全长 3、加适当接头，连接到适当的载体内。4、转化受体细胞，构建为cDNA文库。基本步骤包括：RNA 的提取(例如异硫氰酸胍法，盐酸胍—有机溶剂法，热酚法等等，提取方法的选择主要根据不同的样品而定)，要构建一个高质量的cDNA 文库，获得高质量的mRNA 是至关重要的，所以处理mRNA 样品时必须仔细小心。由于RNA 酶存在所有的生物中，并且能抵抗诸如煮沸这样的物理环境，因此建立一个无RNA 酶的环境对于制备优质RNA很重要。在获得高质量的mRNA 后用反转录酶Oligo(dT)引导下合成cDNA 第1链，cDNA 第2链的合成(用RNA酶H和大肠杆菌DNA 聚合酶I，同时包括使用T4噬菌体多核苷酸酶和大肠杆菌DNA连接酶进行的修复反应)，合成接头的加入、将双链DNA克隆到载体中去、分析cDNA插入片断。扩增cDNA 文库、对建立的cDNA文库进行鉴定。这里强调的是对载体的选择，常规用的是λ 噬菌体，这是因为λ DNA 两端具有由12个核苷酸的粘性末端，可用来构建柯斯质粒，这种质粒能容纳大片段的外源DNA。 由mRNA-cDNA复合体合成cDNA为什么需要RNA酶?同题. 同题. 确实需要RNA酶,但是RNA酶的作用是水解RNA不是合成mRNA~cDNA文库的建立流程：提取mRNA—cDNA第一条链的合成—cDNA第二条链的合成—cDNA末端处理 cDNA第一条链的合 逆转录当然就是从mRNA到cDNA的过程,采用什么酶,哪些底物,引物等成分,在什么条件下才能反转录成cDNA还有这些问题 逆转录reverse transcription：以RNA以模板合成DNA的过程,是RNA病毒的复制形式,需逆转录酶的催化.其过程先以RNA为模板,合成RNA/DNA杂化双链,然后水解RNA链,再以剩下的DNA单链为模板合成DNA双链.逆转录病毒的逆转录酶. mRNA反转录形成cDNA大致分为哪些步骤？ mRNA反转录形成cDNA 大致分为哪些步骤 有反转录酶，可以以RNA为模版合成DNA。这过程需要引物，根据mRNA有3‘polyA尾巴的特点,可以用oligo-dT作为引物，合成cDNA,这样可以自然去除非mRNA的RNA的转录。也可以用随机引物去合成大量不同的cDNA。如果要反转录特定的mRNA，就根据它设计特异性引物反转录，这样理论上只有目的cDNA产生。 从RNA抽提到制成cDNA的全过程 一).构建cDNA文库：以生物细胞的总 mRNA 为模板，用反转录酶合成互补的双链 cDNA，然后接到载体上，转入到宿主后建立的基因文库就是 cDNA 文库。1、mRNA的提取及其完整性的确定 1）总 RNA 的提取 RNA 提取方法：APGC法或NP-40或应用试剂盒提取总RNA 2）mRNA的分离高等真核生物 mRNA 分子的 3' 端均有 poly(A)尾，将总RNA通过寡聚（DT）纤维柱分离mRNA或利用磁珠法制备纯mRNA。在某些情况下，裂解细胞后用蔗糖梯度来制备mRNA-核糖体复合物作为提取mRNA的替换途径。3）mRNA 的纯化 ①按照大小对总 mRNA 进行分级，主要用琼脂糖凝胶电泳和蔗糖密度梯度离心法进行分级；②多聚核糖体的免疫学纯化法，这是利用抗体来纯化合成目的多肽的方法。4）mRNA 完整性的确定确定 mRNA 完整性的方法有三种： ① 直接检测 mRNA 分子的大小；② 测定 mRNA 的转译能力；③ 检测总 mRNA 指导合成 cDNA 第一链长分子的能力。2、cDNA 的合成和克隆 1）cDNA 第一链的合成用亲和层析法得到 mRNA 后，根据 mRNA 分子的 3' 端有 poly(A)尾结构的原理，用 12~20 个核苷酸长的 oligo（dT）与纯化的 mRNA 混合，oligo（dT）会与 poly(A)结合作为反转录酶的引物，反转录反应的产物是一条 RNA-... 关于mRNA 转化为cDNA 与RNA链互补的单链DNA，以其RNA为模板，在适当引物的存在下，由依赖RNA的DNA聚合酶（反转录酶）的作用而合成，并且在合成单链cDNA后，在用碱处理除去与其对应的RNA以后，以...